慢病毒載體服務

服務項目簡介

慢病毒（Lentivirus）是逆轉錄病毒的一種，具有逆轉錄病毒的基本結構和特性：能整合入宿主細胞基因組，長期表達；還擁有比逆轉錄病毒更you越特性：如比逆轉錄病毒具有更高的滴度，不僅可以感染分裂細胞，更重要的是還能感染非分裂的細胞。

利用Lentivirus構建的shRNA表達載體，與化學合成的siRNA和基于瞬時表達載體構建的shRNA相比，一方面可以替代后者，另一方面，Lentivirus-shRNA載體經包裝系統(tǒng)包裝后，可用于感染傳統(tǒng)轉染試劑難于轉染的細胞（如原代培養(yǎng)細胞、懸浮細胞等），并且在感染后可以整合到受感細胞的基因組，進行長時間的穩(wěn)定表達，是制備穩(wěn)定表達shRNA細胞株和進行體內實驗(in vivo)的有效手段。

病毒包裝：用于基因治療、蛋白表達、藥物篩選、基因功能驗證等，是現(xiàn)代分子生物學研究的一個好工具。

本公司慢病毒包裝體系有Invitrogen公司4質粒系統(tǒng)、SBI公司4質粒系統(tǒng)、Clontech公司5質粒系統(tǒng)、Tronolab實驗室3質粒系統(tǒng)等系統(tǒng)，客戶可以選擇，我們也可以根據(jù)客戶需求選擇相應包裝體系。

服務內容

1. 慢病毒包裝服務

客戶提供的感興趣的基因或者基因突變體的慢病毒構建和包裝技術服務，表達框大小限制在9kb之內。

2. siRNA慢病毒服務項目

RNAi產品，其中shRNA由U6啟動子驅動，通過慢病毒介導整合于感染細胞基因組中，實現(xiàn)長期的目的基因敲減。我們可以提供同時攜帶GFP和嘌呤霉素抗性基因，或者單攜帶其中之一RNAi產品。

3. microRNA慢病毒系列產品

這里的基因包括幾乎ALL現(xiàn)有已知目的microRNA，這里物種包括人、小鼠以及大鼠。

4. 過表達慢病毒系列產品（iPS干細胞、細胞因子、營養(yǎng)因子等）

除了客戶提供所包裝的過表達基因，公司還有一系列過表達載體，如構建iPS的SOX-2、OCT-4、NANOG、c-Myc等基因的過表達載體，還有一些細胞因子和營養(yǎng)因子等系列產品。

技術步驟

根據(jù)目的基因相關信息（序列、基因序列號等），構建含有外源基因或序列的重組載體；對于測序正確的重組質粒，提取和純化高質量（不含內毒素）的重組質粒；使用高效重組載體和慢病毒包裝質粒共轉染293T細胞，進行病毒包裝并收集上清液；通過超濾和超速離心濃縮和純化病毒；用病毒感染293T細胞，測定病毒滴度；

用高質量的病毒感染靶細胞，通過實時定量PCR或者Westen blot檢測目的基因表達，也可以進一步進行穩(wěn)定細胞株的篩選用于長期的功能學研究。
1. 根據(jù)目的基因相關信息（序列、基因序列號等）獲取目的基因；
2. 選擇符合實驗要求的載體；
3. 將目的基因構建到慢病毒載體獲得含有目的基因的重組載體；
4. 對于測序正確的重組質粒，提取和純化高質量（不含內毒素）的重組質粒；
5. 使用高效重組載體和慢病毒包裝質粒共轉染293T 細胞，進行病毒包裝并收集上清液；
6. 通過超濾和超速離心濃縮和純化病毒；
7. 使用病毒感染293T細胞，測定病毒滴度。

應用實例

基因功能研究（體內/體外），藥物研發(fā)、細胞建系、基因治療、轉基因動物模型等

應用領域

慢病毒載體能夠產生表達目的基因的高滴度的慢病毒，在周期性和非周期性細胞、干細胞、受精卵以及分化的后代細胞中表達目的基因，實現(xiàn)在多種類型的細胞和轉基因小鼠中te異而穩(wěn)定的基因表達的功能性沉默，為在原代的人和動物細胞組織中快速而高效地研究基因功能，以及產生te定基因表達降低的動物提供了可能性。

服務周期

8~10周左右。

客戶須知（對材料的要求、注意事項）

目前我們能夠為客戶提供從載體構建到慢病毒包裝純化和檢測的一站式服務；同時公司還在高效慢病毒生產技術的基礎上建立并完善了慢病毒載體制備轉基因動物的實驗技術。公司還承接慢病毒操作相關實驗。

服務咨詢及技術支持

電話:

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