免疫共沉淀服務(wù)(Co-IP)

服務(wù)項(xiàng)目簡(jiǎn)介

免疫共沉淀（Co- Immunoprecipitation, Co-IP）是利用抗原和抗體的te異性結(jié)合以及細(xì)菌的Protein A或Gte異性地結(jié)合到免疫

球蛋白的Fc片段的現(xiàn)象開發(fā)出來的方法。其基本原理是，在細(xì)胞裂解液中加入抗興趣蛋白的抗體，孵育后再加入與抗體te異結(jié)合的

結(jié)合 于Agarose珠上的Protein A或G，若細(xì)胞中有與興趣蛋白結(jié)合的目的蛋白，就可以形成這樣一種復(fù)合物：“目的蛋白—興趣蛋

白—抗興趣蛋白抗體—Protein A或G”，經(jīng)變性聚丙烯酰胺凝膠電泳，復(fù)合物又被分開。然后經(jīng)免疫印跡或質(zhì)譜檢測(cè)目的蛋白。這

種方法得到的目的蛋白是在細(xì)胞內(nèi)與興趣蛋白天然結(jié)合的，符合 體內(nèi)實(shí)際情況，得到的結(jié)果可信度高。

技術(shù)步驟

（1）轉(zhuǎn)染后24~48 h 收獲細(xì)胞，加入適量細(xì)胞裂解緩沖液（含蛋白酶抑制劑），冰上裂解30 min, 細(xì)胞裂解液于4 °C， 大轉(zhuǎn)

速離心30 min后取上清；

（2）取少量裂解液以備免疫印跡分析，剩余裂解液中加入適量的相應(yīng)抗體，4 °C緩慢搖晃孵育過夜；

（3）取10μL protein A 或G瓊脂糖珠，用適量裂解緩沖液洗3次，每次3,000 rpm離心3 min；

（4）將預(yù)處理過的10 μl protein A 或G瓊脂糖珠加入到和抗體孵育過夜的細(xì)胞裂解液中4 °C緩慢搖晃孵育2~4 h，使抗體與

protein A或G瓊脂糖珠偶聯(lián)；

（5）免疫沉淀反應(yīng)后，在4 °C 以3,000 rpm 速度離心3 min，將瓊脂糖珠離心至管底；將上清小心吸去，瓊脂糖珠用1mL裂解緩

沖液洗3－4次；后加入15 μL的3×SDS 上樣緩沖液，沸水煮5分鐘；

（6）SDS-PAGE, 免疫印跡或質(zhì)譜儀分析。

應(yīng)用領(lǐng)域

研究細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)相互作用的一種技術(shù)。

服務(wù)周期

接到樣本后1個(gè)月左右。

客戶須知（對(duì)材料的要求、注意事項(xiàng)）

（1）細(xì)胞裂解采用溫和的裂解條件，不能破壞細(xì)胞內(nèi)存在的ALL蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)相互作用，多采用非離子變性劑（NP-40或Triton

X-100)。每種細(xì)胞的裂解條件是不一樣的，通過經(jīng)驗(yàn)確定。不能用高濃度的變性劑（0.2％ SDS)，細(xì)胞裂解液中要加各種酶抑制劑

，如商品化的cocktail。

（2）可能檢測(cè)不到低親和力和瞬間的蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)相互作用；

（3）兩種蛋白質(zhì)的結(jié)合可能不是直接結(jié)合，而可能有弟三者在中間起橋梁作用；

（4）必須在實(shí)驗(yàn)前預(yù)測(cè)目的蛋白是什么，以選擇后檢測(cè)的抗體，所以，若預(yù)測(cè)不正確，實(shí)驗(yàn)就得不到結(jié)果，方法本身具有一定風(fēng)險(xiǎn)。

服務(wù)咨詢及技術(shù)支持