DNA ladder檢測服務(wù)

服務(wù)項(xiàng)目簡介

細(xì)胞核染色質(zhì)DNA斷裂是細(xì)胞凋亡的標(biāo)志特征。在細(xì)胞發(fā)生凋亡時，核酸內(nèi)切酶被激活，選擇性降解染色質(zhì)DNA，形成50-300 kb的大片段，并進(jìn)而在核小體連接處斷裂，形成180-200 bp或其整倍數(shù)的DNA片段，這些DNA片段可從細(xì)胞中提取出來，通過瓊脂糖凝膠電泳，溴化乙啶染色呈現(xiàn)為梯狀條帶（DNA Ladder），并據(jù)此判斷細(xì)胞凋亡產(chǎn)生。

技術(shù)步驟

1. 離心收集105~106細(xì)胞（1500×g，5min）于1.5mL微量離心管中；用PBS洗滌細(xì)胞兩次（離心1500×g，5min），棄上清；

2. 沉淀的細(xì)胞中加入100 μL Lysis Buffer，渦旋振蕩器上劇烈混合10秒，離心1000×g，5min，移上清于另一1.5mL微量離心管中；

3. 沉淀再加入100μL Lysis Buffer重復(fù)上步，合并兩次的上清液；

4. 在上述合并的上清液中加入20μL Solution A，再加入20μL Enzyme A，55℃反應(yīng)1小時；

5. 加入20μL Enzyme B，37℃，1小時；

6. 加入130μL Precipitant和950μL冷乙醇， 混勻，置-20℃，1小時以上或過夜；

7. 4℃，12, 000~14, 000 rpm離心15~30min，小心地棄去上清，收集沉淀的DNA；

8. 加入0.5mL 70%的冷乙醇，洗DNA沉淀，再12, 000~14, 000 rpm離心20min；棄上清，DNA沉淀于室溫干燥10 min后，加入10~15μL TE Buffer，充分?jǐn)嚢枞芙釪NA；

9. 取上述10~15μL樣品加入2~3μL Loading Buffer，1.5%瓊脂糖凝膠電泳（凝膠和電泳緩沖液TBE均加入0.5μg/mL的溴化乙啶），5V/cm電泳1小時，紫外燈下觀察并拍照。

應(yīng)用實(shí)例

細(xì)胞凋亡檢測

服務(wù)周期

我公司在正式接受實(shí)驗(yàn)委托1~2周左右完成實(shí)驗(yàn)并交付實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

服務(wù)咨詢及技術(shù)支持

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