隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(RAPD)服務(wù)

世聯(lián)博研生命科研服務(wù)中心提供隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(RAPD)服務(wù)。運(yùn)用隨機(jī)引物擴(kuò)增尋找多態(tài)性DNA片段可作為分子標(biāo)記。這種方法即為

RAPD(Random amplified polymorphic DNA，隨機(jī)擴(kuò)增的多態(tài)性DNA)。盡管RAPD技術(shù)誕生的時間很短，但由于其te的檢測DNA多

態(tài)性的方式以及快速、簡便的特點(diǎn)，使這個技術(shù)已滲透于基因組研究的各個方面。

收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)

DNA提取：60/樣品

隨機(jī)引物合成：<100條 12元/條；100-500條 9元/條；501-1000條 7元/條；>1000條 5元/條

RAPD： <8個樣 100元/樣；8-50個樣 80元/樣；>50個樣 詢價

服務(wù)周期

我公司在接受實(shí)驗(yàn)委托1~2周內(nèi)完成實(shí)驗(yàn)并交付實(shí)驗(yàn)報告。

客戶須知（對材料的要求、注意事項(xiàng)）

服務(wù)程序

1. 可在我公司網(wǎng)站內(nèi)直接填寫《隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA服務(wù)訂單》發(fā)至我公司郵箱。

2. 可下載訂單，填寫完成后，用傳真的形式發(fā)到我公司。

3. 可電話聯(lián)系詳談有關(guān)具體要求和服務(wù)內(nèi)容。

4. 簽訂《隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA服務(wù)合同》，預(yù)付實(shí)驗(yàn)總費(fèi)用的50%作為實(shí)驗(yàn)預(yù)付款。

5. 寄送：委托單位的試驗(yàn)材料和試劑等均須采用te快專遞形式郵寄，有低溫要求的、固定要求的，按低溫保存、固定防碎方法運(yùn)輸，以確保實(shí)驗(yàn)物品的安可靠。

6. 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，本公司將結(jié)果及時發(fā)給客戶，同時根據(jù)客戶要求處理相關(guān)材料：

7. 客戶應(yīng)對所提供的材料及信息負(fù)責(zé)，如因客戶提供的材料及信息不準(zhǔn)確而引起的實(shí)驗(yàn)延誤或經(jīng)濟(jì)損失由客戶承擔(dān)。

服務(wù)咨詢及技術(shù)支持

·電話:

·Email:[email protected]

服務(wù)項(xiàng)目簡介

RAPD技術(shù)建立于PCR技術(shù)基礎(chǔ)上，它是利用一系列(通常數(shù)百個)不同的隨機(jī)排列堿基順序的寡聚核苷酸單鏈(通常為十聚體)為引物，

對所研究基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增聚丙烯酰胺或瓊脂糖電泳分離，經(jīng)染色或放射性自顯影來檢測擴(kuò)增產(chǎn)物DNA片段的多態(tài)性。

這些擴(kuò)增產(chǎn)物DNA片段的多態(tài)性反映了基因組相應(yīng)區(qū)域的DNA多態(tài)性。RAPD所用的一系列引物DNA序列各不相同，

但對于任一te異的引物，它同基因組DNA序列有其te異的結(jié)合位點(diǎn)，這些te異的結(jié)合位點(diǎn)在基因組某些區(qū)域內(nèi)的

分布如符合PCR擴(kuò)增反應(yīng)的條件，即引物在模板的兩條鏈上有互補(bǔ)位置，且引物3'端相距在一定的長度范圍之內(nèi)，

就可擴(kuò)增出DNA片段。因此如果基因組在這些區(qū)域發(fā)生DNA片段插入、缺失或堿基突變就可能導(dǎo)致這些te定結(jié)合位點(diǎn)

分布發(fā)生相應(yīng)的變化，而使PCR產(chǎn)物增加、缺少或發(fā)生分子量的改變。通過對PCR產(chǎn)物檢測即可檢出基因組DNA的多態(tài)性。

分析時可用的引物數(shù)很大，雖然對每一個引物而言其檢測基因組DNA多態(tài)性的區(qū)域是有限的，但是利用一系列引物則可

以使檢測區(qū)域幾乎覆蓋整個基因組。因此RAPD可以對整個基因組DNA進(jìn)行多態(tài)性檢測。另外

，RAPD片段克隆后可作為RFLP的分子標(biāo)記進(jìn)行作圖分析。

該技術(shù)具有以下的you越性：所需DNA 樣品少，但對純度要求很高；能直接對基因組進(jìn)行檢測；

不需要先預(yù)設(shè)計探針和對基因組進(jìn)行測序；不需要Southern 雜交、銀染等復(fù)雜步驟；操作安；

不需用同位素示蹤；對人一般不構(gòu)成危害。

技術(shù)步驟

一、 材料

不同來源的DNA(50 ng/ul)。

二、設(shè)備

PCR儀，PCR管或硅化的0.2 ml eppendorf管，電泳裝置。

三、試劑

1、隨機(jī)引物(10 mer) (5 μmol/L)

2、Taq酶

3、10xPCR 緩沖液

4、MgCl2：25 mmol/L

5、dNTP：每種2.5 mmol/L

四、操作步驟：

1. 在25 μl反應(yīng)體系中,加入

模板DNA 1 μl (50 ng)

隨機(jī)引物 1 μl (約5 pmol)

10×PCR Buffer 2.5 μl

MgCl2 2 μl

dNTP 2 μl

Taq酶 1單位（U）

加ddH2O 至 25 μl

混勻稍離心，加一滴礦物油。

2. 在加熱至90℃以上的PCR儀中預(yù)變性94 ℃ 2分鐘, 然后循環(huán): 94 ℃ 1分鐘，36 ℃ 1分鐘，72 ℃ 1分鐘，共40輪循環(huán)。

3. 循環(huán)結(jié)束后, 72 ℃ 10分鐘，4℃保存。

4. 取PCR產(chǎn)物15 μl加3 μl上樣緩沖液(6×)于2% 瓊脂糖膠上電泳, 穩(wěn)壓50~100 Ｖ（電壓低帶型整齊，分辨率高）。

5. 電泳結(jié)束，觀察、拍照。

FAQ（Frequently Asked Questions）

1. 隨機(jī)引物的長度一般是多少？

隨機(jī)引物一般是8-10堿基的寡核苷酸引物。

2. 如何選擇隨機(jī)引物？

可以查詢相關(guān)文獻(xiàn)，看看文獻(xiàn)報道采用的是什么引物，一般來說，合適的引物都是通過大量篩選得到的。隨機(jī)引物的篩選要遵守以下原則：

（1）產(chǎn)物的DNA條帶清晰可見；

（2）在分析的樣品之間存在有較高的多態(tài)性；

（3）產(chǎn)生多態(tài)性DNA條帶具有可重復(fù)性。

3. 貴公司說隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA對DNA的純度要求很高，DNA的純度一般要達(dá)到什么水平？

一般測OD值，若A260/A230>=2.0; A260/A280>=1.8 即表明純度達(dá)到要求。

4. RAPD與PCR技術(shù)相比的you缺點(diǎn)？

①不使用同位素，減少了對工作人員健康的危害；

②可以在物種沒有任何分子生物學(xué)研究的情況下分析其DNA多態(tài)性；

③對模板DNA的純度要求不高；

④技術(shù)簡單，無需克隆DNA探針，無需進(jìn)行分子雜交；

⑤靈敏度高，可提供豐富的多態(tài)性；

⑥RAPD引物沒有嚴(yán)格的種屬界限，同一套引物可以應(yīng)用于任何一種生物的研究，因而具有廣泛性、通用性。

但是，RAPD技術(shù)較易受到各種因素的影響。無論是模板的質(zhì)量和濃度，短的引物序列，PCR的循環(huán)次數(shù)，基因組DNA的復(fù)雜性，技術(shù)

設(shè)備等，都有可能是RAPD技術(shù)重復(fù)性差的直接原因。目前，多從以下幾個方面來提高反應(yīng)的穩(wěn)定性：

①操作規(guī)范，反應(yīng)體系的組成要力求一致，盡可能地使RAPD反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)化；

②提高擴(kuò)增片段的分辨率；

③將RAPD標(biāo)記轉(zhuǎn)化為SCAR標(biāo)記后再進(jìn)行常規(guī)的PCR分析，可以提高反應(yīng)的穩(wěn)定性及可靠性。

5. RAPD主要運(yùn)用在哪些方面？

目前，RAPD標(biāo)記已被廣泛應(yīng)用于分子生藥學(xué)各方面：

①生物多樣性：隨著植物藥研究的不斷深入，可持續(xù)開發(fā)利用藥用植物資源的問題越來越受到重視。應(yīng)用RAPD技術(shù)進(jìn)行藥用植物生

物多樣性研究，可以在遺傳多樣性水平上了解天然產(chǎn)物多樣性與物種、生態(tài)及地理分布的關(guān)系，挖掘潛在的藥物資源，為開發(fā)新藥

尋找途徑。RAPD方法可以檢測物種的遺傳多樣性，探討物種的親緣關(guān)系和進(jìn)化趨勢。因此它是藥用植物資源保護(hù)和種質(zhì)資源保存的

依據(jù)，te別是對瀕危物種的研究更具有實(shí)際意義。

②RAPD標(biāo)記可用于生藥分類，在DNA分子水平上鑒別生物不同種、亞種、變種甚至株。

③RAPD標(biāo)記可用來制作生物類生藥系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系上的樹狀圖，te別是種內(nèi)水平。這為生藥親緣進(jìn)化關(guān)系,尋找新的藥用資源開辟了新途徑。

④RAPD標(biāo)記可用于構(gòu)建基因圖譜，進(jìn)行基因定位，和對未知序列的DNA片段擴(kuò)增與測序。

⑤RAPD標(biāo)記亦可用于遺傳連鎖圖譜的構(gòu)建，指導(dǎo)藥用植物育種，防止品種間雜化和自交，選育you良性狀的品種。