DNA或RNA提取服務(wù)

DNA或RNA提取服務(wù) - 分子生物學(xué)服務(wù)

世聯(lián)博研生命科研服務(wù)中心為您提供DNA、RNA抽提服務(wù)，服務(wù)內(nèi)容：從血樣、動植物組織、細(xì)胞、細(xì)菌等抽提核酸（DNA/RNA）；可以提供定量分析數(shù)據(jù) 。同時提供后續(xù)基因型鑒定如PCR、PCR-RFLP等服務(wù)。價廉質(zhì)you，歡迎垂詢(免費(fèi)咨詢電話：)。

收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)

1、DNA提取

細(xì)胞提取價格為50元/樣品

組織提取價格為60元/樣品

te殊組織，價格另議

2、RNA提取

細(xì)胞提取價格為50元/樣品

組織提取價格為60元/樣品

te殊組織，價格另議

服務(wù)周期

<30個樣品 3-5個工作日；>30個樣品 5-7個工作日。

客戶須知

好使用新鮮的樣品或取樣后立即在液氮中冷凍保存的樣品，避免反復(fù)凍融，因為會導(dǎo)致提取的DNA片段較小且提取量下降。樣品運(yùn)輸要求在低溫下進(jìn)行，一般采用保溫性較好的容器，如泡沫塑料盒、保溫瓶等，并且在容器中加入足夠量的液氮或干冰，徹底封存好容器。要注意保存管的密封性，標(biāo)記不易脫落，附上樣品的描述和實(shí)驗方案。RNA 樣品保存在70%的乙醇和0.1 M醋酸鈉中低溫運(yùn)輸。

服務(wù)程序

1. 可在我公司網(wǎng)站內(nèi)直接填寫《DNA/RNA提取服務(wù)訂單》發(fā)至我公司郵箱。

2. 可下載訂單，填寫完成后，用傳真的形式發(fā)到我公司。

3. 可電話聯(lián)系詳談有關(guān)具體要求和服務(wù)內(nèi)容。

4. 簽訂《DNA/RNA提取服務(wù)合同》，預(yù)付實(shí)驗總費(fèi)用的50%作為實(shí)驗預(yù)付款。

5. 寄送：委托單位的試驗材料和試劑等均須采用te快專遞形式郵寄，有低溫要求的、固定要求的，按低溫保存、固定防碎方法運(yùn)輸，以確保實(shí)驗物品的安可靠。

6. 實(shí)驗結(jié)束后，本公司將結(jié)果及時發(fā)給客戶，同時根據(jù)客戶要求處理相關(guān)材料：實(shí)驗報告、抽提產(chǎn)物及電泳圖片。

7. 客戶應(yīng)對所提供的材料及信息負(fù)責(zé)，如因客戶提供的材料及信息不準(zhǔn)確而引起的實(shí)驗延誤或經(jīng)濟(jì)損失由客戶承擔(dān)。

服務(wù)咨詢及技術(shù)支持

·電話:

·Email:[email protected]

RNA提取

TRIZOL法

樣本來源：血液、組織、培養(yǎng)的細(xì)胞，糞便、口腔粘膜、唾液、石蠟包埋組織、血痕等。

每1 mg組織或1×106培養(yǎng)細(xì)胞預(yù)期的RNA產(chǎn)量：
1. 肝和脾，6~10 μg
2. 腎，3~4 μg
3. 骨骼肌和腦組織，1~1.5 μg
4. 胎盤，1~4 μg
5. 上皮細(xì)胞(1×106 cultured cells)，8~15 μg
6. 纖維母細(xì)胞(1×106 cultured cells)，5~7 μg

技術(shù)流程：
1. 勻漿化作用
2. 分離階段
3. RNA的沉淀
4. RNA的洗脫
5. RNA的再溶解
6. RNA的保存

TRIzol法抽提總RNA流程：

組織100 mg
↓
加1 ml TRIzol
↓
勻漿（要徹底，后轉(zhuǎn)至EP管）
（組織勻漿量>100 mg時分裝1 ml/每EP管）
↓
顛倒混勻10下，室溫5分鐘（30 °C孵育）
↓
加氯仿1/5體積（0.2 ml）（必須按總體積的1/5）
↓
顛倒混勻15 s，室溫2~5分鐘（30 °C孵育）
↓
4 ℃，離心12000 g，15分鐘
↓
轉(zhuǎn)上層水相（約400 μl）于另一1.5 ml EP管中
↓
加等體積異丙醇（約400 -500 μl），混勻室溫10分鐘
↓
4 ℃，離心12000 g，10分鐘（30 °C孵育）
↓
棄上清
↓
加冰預(yù)冷的75%乙醇（用DEPC水配）1ml
↓
4 ℃離心7500 g，5分鐘
↓
棄上清，空氣干燥5~10分鐘（不能完干燥）
↓
溶于DEPC水中至20 μl（10 μl~20 μl）
（可在55~60 ℃水中，10分鐘助溶）

DNA抽提

技術(shù)原理:

核酸抽提包含樣品的裂解和純化兩大步驟。裂解是使樣品中的核酸游離在裂解體系中的過程，純化則是使核酸與裂解體系中的其它成分，如蛋白質(zhì)、鹽及其它雜質(zhì)徹底分離的過程。按照RNA 分離操作方案在完移去水樣層后，勻漿中的DNA 存在于中間層和苯酚層中也可以被分離出來。在沉淀和多次洗脫后，DNA 溶解在8 mM NaOH中。

用途：

從組織和培養(yǎng)細(xì)胞中抽提的DNA 可以用來做樣品中DNA 含量的測定, 通過PCR擴(kuò)增DNA。同時抽提的基因組DNA 可以用于對Northern analysis的結(jié)果進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，因為DNA 變異程度比總RNA 或組織重量要小。

技術(shù)流程：
1. DNA 的沉淀
2. DNA 的洗脫
3. DNA 的再溶解
4. DNA的保存。

5. DNA的定量及預(yù)期的產(chǎn)量
每mg組織或1×106培養(yǎng)細(xì)胞預(yù)期的DNA產(chǎn)量：
1）肝和腎，3~4 μg
2）骨骼肌，腦組織，和胎盤，2~3 μg
3）培養(yǎng)的人，大鼠，小鼠細(xì)胞(1×106)，5~7 μg
4）纖維母細(xì)胞，5~7 μg

載體質(zhì)粒(carrier vector)的抽提、純化及檢測

（一）試劑盒抽提法

技術(shù)原理：

DNA雙鏈與硅化材料相互作用的原理是DNA分子中磷酸二酯鍵在較低pH 值和高鹽濃度環(huán)境下脫水，使得暴露的磷酸基團(tuán)吸附硅膠。雙鏈的DNA分子一旦被硅膠吸附，則以天然狀態(tài)或部分變性狀態(tài)存在，不能用洗脫RNA或碳水化合物等生物大分子的溶劑（如70％乙醇）將其洗脫下來。但是，經(jīng)過水溶性緩沖液（通常為TE或水）重新水化后，DNA 就能從層析柱上定量回收。

技術(shù)流程：
1. 大腸桿菌接種，活化菌株。
2. 菌株培養(yǎng)過夜。
3. 收集細(xì)胞。
5. 懸浮細(xì)菌沉淀。
6. DNA質(zhì)粒抽提、純化和過柱。
7. 洗脫質(zhì)粒DNA。
8. 保存。

FAQ（Frequently Asked Questions）

1.提取的RNA降解，原因有哪些？怎樣避免？

RNA酶是RNA降解的主要原因，RNA酶是一類生物活性非常穩(wěn)定的酶，除細(xì)胞內(nèi)RNA酶外，環(huán)境中的灰塵、各種實(shí)驗器皿和試劑、人類皮膚的汗液、唾液中均存在RNA酶，且RNA酶耐熱、耐酸堿，煮沸也不能使之完失活，蛋白變性劑可使之暫時失活，但變性劑去除后，又可恢復(fù)活性。所以在RNA提取過程中必須避免外源性RNA酶的污染和抑制內(nèi)源性RNA酶的活性。

（1）去除外源性的RNA酶污染

實(shí)驗過程必須戴手套操作，ALL溶液和水均需加0.1%的DEPC（焦碳酸二乙酯，是RNA酶的強(qiáng)抑制劑）室溫攪拌過夜，然后高壓處理，玻璃器皿洗凈后在250攝氏度烘烤4小時。塑料器材好使用滅菌的一次性用品等。

（2）抑制內(nèi)源性的RNA酶的活性

細(xì)胞破碎時，RNA酶釋放出來，所以力爭在RNA提取的初始階段，通過加入RNA酶抑制劑來抑制內(nèi)源性的RNA酶的活性�？傊�，RNA降解的原因很多，操作時一定要小心。

2.te殊組織價格另議，什么組織被你們公司認(rèn)為是te殊組織？價格會比一般組織貴多少？

植物葉、花等te殊組織，具體價格請來電詢價。

3.能否告知公司是用什么具體方法提取DNA或RNA的？

公司一般采取DNA或RNA抽提試劑盒來提取。

4.如果是抽提質(zhì)粒，提出來的質(zhì)粒純度能達(dá)到轉(zhuǎn)染級別嗎？

我們抽提出來的質(zhì)粒均進(jìn)行純化，質(zhì)粒抽提分為小提、中提、大提三類，大提可以達(dá)到要求，具體看您需要做什么實(shí)驗。

5.造成OD260 /OD280比值低有哪些原因？如何解決？

（1）蛋白質(zhì)污染：確保不要吸入中間層及有機(jī)相。減少起始樣品量，確保裂解完、徹底。加入氯仿后手先要使勁混勻，并且離心分層的離心力和時間要足夠。解決辦法是用氯仿重新抽提一次，再沉淀、溶解。（2）設(shè)備限制：測定OD260 及OD280 數(shù)值時，要使OD260 讀數(shù)在0.10 -0.50之間。此范圍線性好。（3）用水稀釋樣品：測OD 時，對照及樣品稀釋液請使用10 mM Tris（pH 7.5）。用水作為稀釋液將導(dǎo)致比值的降低。

6.如何解決提取的RNA不溶現(xiàn)象？

（1）75%乙醇清洗沉淀后不要干燥時間過長或加熱干燥。

（2）可以于60 ℃加熱5 min后再于冰上溶解數(shù)小時。

（3）RNA沉淀中含有不溶的蛋白質(zhì)混合物時，應(yīng)注意吸取上清液時，不要讓槍頭接觸蛋白層。

（4）溶解液更換為0.5%的SDS溶液（DEPC處理水配制）。

7.提取的RNA中含有DNA污染怎么解決？

(1) 裂解組織或細(xì)胞使用的變性劑量偏少，加大變性劑的用量。

(2) 使用的組織材料中含有大量的有機(jī)溶劑（如：乙醇、異丙醇等)、高濃度的Buffer、堿性溶劑等，在組織研磨中應(yīng)盡量研磨仔細(xì)，直至研磨成粉末。

(3) 可以使用DNA酶消化處理去除DNA。

8.提取后的DNA或RNA以什么形式運(yùn)輸給我？RNA可以反轉(zhuǎn)錄成DNA嗎？質(zhì)量報告是什么形式的（OD值或者其他）？基因組完整性（如基因組片段基本無斷裂）如何確保？

DNA以干粉的形式提供, RNA一般反轉(zhuǎn)錄為cDNA提供。質(zhì)量報告以O(shè)D值+電泳圖的形式提供。您可通過電泳圖片來判定基因片段的完整性。