| 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)/技術(shù)服務(wù)導(dǎo)航 | |||||||||
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| 新藥研發(fā)CRO | |||||||||
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流式細(xì)胞術(shù)檢測服務(wù)(FACS)
流式細(xì)胞術(shù)檢測（FACS）服務(wù)
世聯(lián)博研生命科學(xué)服務(wù)中心提供流式細(xì)胞術(shù)檢測（FACS）服務(wù)。流式細(xì)胞術(shù)（flow cytometry, FCM)是一種可以對細(xì)胞或亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)進(jìn)行快速測量的新型分析技術(shù)和分選技術(shù)。其特點(diǎn)是①測量速度快；②可進(jìn)行多參數(shù)測量；③是一門綜合性的高科技方法（ 流式細(xì)胞術(shù)綜合了光學(xué)，電子學(xué)，流體力學(xué)，細(xì)胞化學(xué)，免疫學(xué)，激光和計(jì)算機(jī)等多門學(xué)科和技術(shù)）；④既是細(xì)胞分析技術(shù)，又是精確的分選技術(shù)。
服務(wù)內(nèi)容
(1)細(xì)胞周期細(xì)胞；(2)細(xì)胞凋亡；(3)免疫細(xì)胞分型；(4)表面抗原鑒定；(5)細(xì)胞內(nèi)鈣離子檢測；(6)線粒體功能；(7)細(xì)胞分選。
服務(wù)價(jià)格及周期
服務(wù)項(xiàng)目 |
樣品處理 |
應(yīng)用的試劑 |
收費(fèi) |
細(xì)胞周期 |
細(xì)胞——胰酶消化——PBS洗——70%乙醇4℃固定過夜 （不超過一周） |
RNA酶，PI染料 |
<10個(gè)樣品，80元/個(gè) >10個(gè)樣品，60元/個(gè) 試劑費(fèi)已包括。 |
細(xì)胞凋亡 |
新鮮培養(yǎng)的細(xì)胞 |
Annexin V-FITC細(xì)胞凋亡檢測試劑盒 |
<10個(gè)樣品，150元/樣品 >10個(gè)樣品，120元/樣品 已包括試劑費(fèi)用，客戶提供試劑可減20元，另需細(xì)胞培養(yǎng)費(fèi)用。 |
免疫細(xì)胞分型 |
培養(yǎng)的細(xì)胞：如白血病細(xì)胞，客戶刺激好的細(xì)胞、抗凝血、脾勻漿 |
破膜劑，固定劑，刺激劑、te異性抗體（需客戶提供） |
雙染： <10個(gè)樣品，120元/樣品 >10個(gè)樣品，100元/樣品 三染：在原來基礎(chǔ)上加30元 需要分離細(xì)胞、培養(yǎng)、刺激的具體情況另記 |
表面抗原鑒定 |
培養(yǎng)的細(xì)胞 |
te異性抗體（需客戶提供） |
單染： <10個(gè)樣品，80元/樣品 >10個(gè)樣品，60元/樣品 雙染：在原來基礎(chǔ)上加30元 三染：在原來基礎(chǔ)上加30元 |
細(xì)胞內(nèi)鈣離子檢測 |
培養(yǎng)的細(xì)胞 |
Fluo-3 AM(鈣離子熒光探針) |
<10個(gè)樣品，100元/樣 >10個(gè)樣品，80元/樣品（已包含試劑） |
線粒體功能 |
僅適用于懸浮或貼壁培養(yǎng)的新鮮細(xì)胞 |
客戶提供試劑盒 |
檢測費(fèi)可同細(xì)胞周期 |
細(xì)胞分選 |
收費(fèi)：標(biāo)記費(fèi)用+分選儀使用費(fèi)用價(jià)格體系類似于共聚焦 |
我公司在正式接受實(shí)驗(yàn)委托1~2周左右交付實(shí)驗(yàn)結(jié)果。所提供的實(shí)驗(yàn)結(jié)果忠實(shí)于樣本的實(shí)際情況。
客戶須知
1、細(xì)胞數(shù)量達(dá)到檢測所需（細(xì)胞周期1x106、細(xì)胞凋亡3x106），生長良好，無污染，附有細(xì)胞生長照片，注明實(shí)驗(yàn)檢測項(xiàng)目所需試劑盒。
2、外周血：EDTA或肝素抗凝血，5ml左右；來源于人、小鼠、大鼠或其它。
3、試劑：部分常用熒光探針，如PI等，我公司可免費(fèi)提供；te殊標(biāo)記物，如CD抗體等，用戶須另行購買，我公司可以代購；用戶所提供抗體應(yīng)可與樣本發(fā)生te異性識別反應(yīng)。
4、樣品包裝要求：細(xì)胞培養(yǎng)在培養(yǎng)瓶中或操作前樣本于合適的條件保存。
服務(wù)程序
1. 可在我公司網(wǎng)站內(nèi)直接填寫《流式細(xì)胞術(shù)檢測（FACS）服務(wù)訂單》發(fā)至我公司郵箱。
2. 可下載訂單，填寫完成后，用傳真的形式發(fā)到我公司。
3. 可電話聯(lián)系詳談?dòng)嘘P(guān)具體要求和服務(wù)內(nèi)容。
4. 簽訂《流式細(xì)胞術(shù)檢測（FACS）服務(wù)合同》，預(yù)付實(shí)驗(yàn)總費(fèi)用的50%作為實(shí)驗(yàn)預(yù)付款。
5. 寄送：委托單位的試驗(yàn)材料和試劑等均須采用te快專遞形式郵寄，有低溫要求的、固定要求的，按低溫保存、固定防碎方法運(yùn)輸，以確保實(shí)驗(yàn)物品的安可靠。
6. 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，本公司將以下結(jié)果及時(shí)發(fā)給客戶，同時(shí)根據(jù)客戶要求處理相關(guān)材料：
·實(shí)驗(yàn)方法、步驟、所用試劑、儀器等。
·流式實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
7. 客戶應(yīng)對所提供的材料及信息負(fù)責(zé)，如因客戶提供的材料及信息不準(zhǔn)確而引起的實(shí)驗(yàn)延誤或經(jīng)濟(jì)損失由客戶承擔(dān)。
·電話:
·Email:[email protected]
附：流式細(xì)胞術(shù)檢測樣品制備方法：
A. 直接標(biāo)記抗體（FITC標(biāo)記抗體）：
(1) 收集1×106個(gè)細(xì)胞，800rpm離心5min，4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘，800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞，800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞，冰上孵育10min，800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個(gè)細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定，待測即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。
B. 未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法：
（1）收集2×106個(gè)細(xì)胞，用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次，800rpm離心5min。
（2）用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min；2ml PBS重懸細(xì)胞，800rpm離心5min；
（3）用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞，冰上放置10min,800rpm離心5min。
（4）加入飽和劑量未標(biāo)記抗體，冰上放置40min,800rpm離心5min，用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞，800rpm離心5min，洗去未結(jié)合一抗，重復(fù)一次。
（5）加入熒光標(biāo)記（FITC）標(biāo)記的二抗，冰上避光放置40min后，800rpm離心5min，去上清，PBS洗滌兩次。
（6）加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞；固定待測。
（7）流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。
C.細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品（PI染色）的制備：
（1）待測樣本制成單細(xì)胞懸液，然后200g離心5分鐘，棄上清。
（2）用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定，4℃保存，至少固定18小時(shí)。
（3）調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升，取1毫升細(xì)胞懸液，用PBS洗三次，細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中，37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
（4）PI染液終濃度為50微克/毫升，RNase A終濃度為20微克/毫升。
注：本方法僅供參考，如有其它要求，請?jiān)谒蜆忧罢f明。
技術(shù)步驟
① 樣品制備：培養(yǎng)細(xì)胞或新鮮組織制成單細(xì)胞懸液
② 熒光標(biāo)記：直接或間接標(biāo)記
③ 上機(jī)檢測
應(yīng)用實(shí)例：
① 直接標(biāo)記抗體（FITC標(biāo)記抗體）
② 未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記
③ 細(xì)胞周期，細(xì)胞凋亡及DNA多倍體分析（PI染色）
應(yīng)用領(lǐng)域
① 細(xì)胞表面標(biāo)志的檢測
② 細(xì)胞內(nèi)和體液中細(xì)胞因子的測定
③ DNA含量及DNA倍體分析
④ 細(xì)胞凋亡分析
FAQ（Frequently Asked Questions）
1. 可否由我提供細(xì)胞和處理的藥物，你們按照我的要求處理后直接做流式？價(jià)格怎么算？
可以.價(jià)格另計(jì).具體參看是何種實(shí)驗(yàn).具體請來電咨詢.
2. 我有31個(gè)樣品細(xì)胞周期的9個(gè),免疫細(xì)胞分型雙染的8個(gè),三染的14個(gè),能否給點(diǎn)you惠.
按各個(gè)不同實(shí)驗(yàn)的價(jià)格算,但可以在總價(jià)上給部分you惠(來電詢問).
3. 請問貴公司FACS流式檢測采用的是什么儀器？
BD流式儀
4. 流式檢測送檢樣品有什么要求？
各個(gè)實(shí)驗(yàn)有不同的要求,請來電詢問.
5. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果，如圖片，能夠符合高水平雜志發(fā)表文章的要求嗎？如果達(dá)不到怎么辦？
本公司只提供原始數(shù)據(jù),配套儀器及軟件所呈現(xiàn)出來的圖片,如需數(shù)據(jù)分析,價(jià)格另計(jì).
實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù):自己設(shè)計(jì)方案,我們設(shè)計(jì)的方案中間可能會有問題,
6. 你們公司采用的是什么儀器，如何確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定與可靠性。
ABI 7300
我們的實(shí)驗(yàn)都是由專業(yè)技術(shù)人員操作,基本可以排除人員因素; 實(shí)驗(yàn)前需要測驗(yàn)樣品,如樣品不達(dá)標(biāo),則無法進(jìn)行該實(shí)驗(yàn).
7. 探針法和染料法有什么區(qū)別嗎，哪種方法的定量效果更好？
探針法,探針是te異性的,染料無te異性.
8. 絕對定量與相對定量有什么區(qū)別，一般發(fā)表的論文用的是什么定量方法？
相對定量的結(jié)果只是給出一個(gè)大致的數(shù)量比;而絕對定量的結(jié)果呈現(xiàn)的是一個(gè)具體的數(shù)量值.一般論文采用相對定量方法.
9. 是否有REAL-TIME PCR引物合成服務(wù)，客戶需要提供哪些信息？
1）生物種 (Human、Mouse、Rat、Cow、Dog、Chicken)。
2）目的基因信息 (GenBank Acc、Gene ID、關(guān)鍵詞)。
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