免疫組化技術(shù)服務(wù)

世聯(lián)博研生命科學(xué)服務(wù)中心長(zhǎng)期專業(yè)對(duì)外承接免疫組化技術(shù)服務(wù)，世聯(lián)博研生命科學(xué)服務(wù)中心提供的對(duì)外免疫組化技術(shù)服務(wù)不僅具有國(guó)內(nèi)外的技術(shù)水

平，更有良好的售后服務(wù)和you質(zhì)的解決方案。

服務(wù)范圍

本服務(wù)項(xiàng)目主要接收委托單位的蠟塊和切片，進(jìn)行免疫組化檢測(cè)，提供高質(zhì)量免疫組化染色和分析結(jié)果。如：腫瘤相關(guān)基因的耐藥

、預(yù)后、癌基因、抑癌基因，有關(guān)糖尿病各種蛋白的表達(dá)，正常、變異神經(jīng)細(xì)胞的表達(dá)等其它基礎(chǔ)研究領(lǐng)域的免疫組化檢測(cè)。

收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)

1、組織的石蠟包埋與石蠟切片：

客戶提供石蠟包埋組織：<50張 500元；>50張 10元/張

2、細(xì)胞片：

客戶提供生長(zhǎng)良好的一瓶細(xì)胞，本公司提供傳代培養(yǎng)的ALL器材和處理好的玻片，制備細(xì)胞爬片，收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：100 元 / 批，每批可

提供10 張左右細(xì)胞片。

3、免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)服務(wù)：

方法：使用 HRP 標(biāo)記系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè)

客戶提供組織切片或細(xì)胞爬片，免疫組化服務(wù)費(fèi)用為80元/抗體，若切片數(shù)量少于10張，一次服務(wù)收費(fèi)800元。若切片數(shù)大于40張，

費(fèi)用為70元/張。

客戶須知（對(duì)材料的要求、注意事項(xiàng)）

1.客戶須在實(shí)驗(yàn)開始前確保其提供材料的數(shù)量和質(zhì)量，并提供相關(guān)信息。

A. 客戶可以提供相應(yīng)的組織切片、細(xì)胞爬片等，也可提供細(xì)胞或組織，提供組織時(shí)需提供盡量多的新鮮樣品（組織：10-20mg米粒

大小或直接提供≥1立方厘米大的石蠟樣本），樣本需-20℃保存。新鮮樣品立即存于液氮或-80℃保存不超過一個(gè)星期。

B.一抗連同抗體說明書由客戶提供，也可由本公司提供或幫忙購(gòu)買，費(fèi)用另計(jì)。

2.本公司在收到客戶提供的研究材料后的弟二個(gè)工作日起開始實(shí)驗(yàn)。

服務(wù)程序

1.可在我公司網(wǎng)站內(nèi)直接填寫《免疫組化技術(shù)服務(wù)訂單》發(fā)至我公司郵箱。

2.可下載訂單，填寫完成后，用傳真的形式發(fā)到我公司。

3.可電話聯(lián)系詳談?dòng)嘘P(guān)具體要求和服務(wù)內(nèi)容。

4.簽訂《免疫組化技術(shù)服務(wù)合同》，預(yù)付實(shí)驗(yàn)總費(fèi)用的50%作為實(shí)驗(yàn)預(yù)付款。

5.寄送：委托單位的試驗(yàn)材料和試劑等均須采用te快專遞形式郵寄，有低溫要求的、固定要求的，按低溫保存、固定防碎方法運(yùn)輸，以確保實(shí)驗(yàn)物品的安可靠。

6.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，本公司將結(jié)果及時(shí)發(fā)給客戶，同時(shí)根據(jù)客戶要求處理相關(guān)材料：

·免疫組化圖片；

·詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)步驟；

·完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（材料，方法，實(shí)驗(yàn)結(jié)果及結(jié)果說明）。

7.客戶應(yīng)對(duì)所提供的材料及信息負(fù)責(zé)，如因客戶提供的材料及信息不準(zhǔn)確而引起的實(shí)驗(yàn)延誤或經(jīng)濟(jì)損失部由客戶承擔(dān)。

服務(wù)咨詢及技術(shù)支持

電話:

Email:[email protected]

免疫組化實(shí)驗(yàn)原理

根據(jù)抗原抗體反應(yīng)和化學(xué)顯色原理，組織切片或細(xì)胞標(biāo)本中的抗原先和一抗結(jié)合，再利用一抗與標(biāo)記生物素、熒光素等的二抗進(jìn)行

反應(yīng)，前者再用標(biāo)記辣根過氧化物酶（HRP）或堿性磷酸酶（AKP）等的抗生物素（如鏈霉親和素等）結(jié)合，后通過呈色反應(yīng)或熒

光來顯示細(xì)胞或組織中化學(xué)成分，在光學(xué)顯微鏡或熒光顯微鏡下可清晰看見細(xì)胞內(nèi)發(fā)生的抗原抗體反應(yīng)產(chǎn)物，從而能夠在細(xì)胞爬片

或組織切片上原位確定某些化學(xué)成分的分布和含量。

免疫組化主要步驟

（一）切片制備

1.洗載玻片：將載玻片置于重鉻酸鉀和濃H2SO4混合液中，目的是為了將載玻片上的硅膠等除去，同時(shí)使一些肉眼看不見的凹凸不平

的表面變平整，便于組織吸附，然后置于清水中清洗，除去殘余的重鉻酸鉀和濃H2SO4 (大約沖一個(gè)小時(shí)左右)，再將載玻片浸泡于

酒精之中，然后放到架子上，置于37°C溫箱中，將多聚賴氨酸涂布于玻片的表面，由于Lys帶正電，而大多數(shù)的組織帶負(fù)電荷，從

而產(chǎn)生吸附作用。

2.包埋組織：先在鐵模具中加入一些液態(tài)石蠟，先稍微冷卻，然后再將待包埋的組織置于石蠟之中，并排列整齊，再將塑料模具盒

蓋上，后加入少許液體石蠟，進(jìn)行冷凍，使石蠟變成固態(tài)。
3.切片：將包埋好的組織從模具上取下來，并置于石蠟切片機(jī)上，切片機(jī)通過調(diào)節(jié)上下左右來使組織和切割方向一致，然后調(diào)節(jié)切

片的厚度，一般為5mm， 如果比較難切，則可以適當(dāng)調(diào)整厚度。用小鑷子將包含有完整組織的載玻片置于40°C溫水中。

4.撈組織：當(dāng)組織載玻片置于40°C溫水中之前，要先將水浴中的氣泡趕走，以免氣泡受熱上浮而貼到組織上，組織受熱展開，好

是組織不起皺紋，用載玻片撈組織時(shí)，一般取載玻片的下1/3或者下1/2一般每種組織撈5-6張，其中2-3張是備用的，每張載玻片上

通常撈兩份組織，做對(duì)照使用，這樣形成的誤差就比較小了，而且撈載玻片的時(shí)候好方向一致，以便觀察，再將撈出來的載玻片

置于架子上，放入37°C溫箱中烘干。

（二）免疫組化染色流程
SP法

1）脫蠟、水化；

2）PBS洗2～3次各5分鐘；

3）3%H2O2（80%甲醇）滴加在TMA上，室溫靜置10分鐘；

4）PBS洗2～3次各5分鐘；

5）抗原修復(fù)；

6）PBS洗2～3次各5分鐘；

7）滴加正常山羊血清封閉液，室溫20分鐘。甩去多余液體。

8）滴加Ⅰ抗50μl，室溫靜置1小時(shí)或者4℃過夜或者37℃1小時(shí)。

9）4℃過夜后需在37℃復(fù)溫45分鐘。

10）PBS洗3次各5分鐘；

11）滴加Ⅱ抗40～50μl，室溫靜置，或37℃1小時(shí)；

12）II抗中可加入0.05%的tween-20。

13）PBS洗3次各5分鐘；

14）DAB顯色5～10分鐘，在顯微鏡下掌握染色程度；

15）PBS或自來水沖洗10分鐘；

16）蘇木精復(fù)染2分鐘，鹽酸酒精分化；

17）自來水沖洗10～15分鐘；

18）脫水、透明、封片、鏡檢。

SABC法

1）脫蠟、水化。

2）PBS洗兩次各5分鐘。

3）用蒸餾水或PBS配置新鮮的3%H2O2，室溫封閉5～10分鐘，蒸餾水洗3次。

4）抗原修復(fù)。

5）PBS洗5分鐘。

6）滴加正常山羊血清封閉液，室溫20分鐘。甩去多余液體。

7）滴加Ⅰ抗，室溫1小時(shí)或者4℃過夜或者37℃1小時(shí)（4℃過夜后在37℃復(fù)溫45分鐘）。

8）PBS洗三次每次2分鐘。

9）滴加生物素化二抗，20℃～37℃20分鐘。

10）PBC洗3次每次2分鐘。

11）滴加試劑SABC，20℃～37℃20分鐘。

12）PBS洗4次每次5分鐘。

13）DAB顯色：DAB顯色試劑盒或者自配顯色劑顯色（鏡下掌握顯色程度）。

14）蒸餾水洗。蘇木素復(fù)染2分鐘、鹽酸酒精分化。

15）脫水、透明、封片、鏡檢。

FAQ（Frequently Asked Questions）

1. 如果由公司制作石蠟包埋切片，大概要提供多少數(shù)量的組織？

提供體積大約為25mm3組織樣品。

2. 切片制作好，觀察完后可以寄回我手里嗎？

可以的。