單鏈構象多態(tài)性分析服務 (PCR-SSCP)

單鏈構象多態(tài)性分析服務 (PCR-SSCP)

世聯(lián)博研生命科學服務中心提供單鏈構象多態(tài)性分析服務(PCR-SSCP)。PCR-SSCP分析技術是一種DNA單鏈凝膠電泳技術，它根據(jù)形成不

同構象的等長DNA單鏈在中性聚丙烯酰胺凝膠中的電泳遷移率變化來檢測基因變異。該技術已被廣泛用于癌基因和抗癌基因變異的檢

測、遺傳病的致病基因分析以及基因診斷、基因制圖等領域。世聯(lián)博研生命科學服務中心將會為您在單鏈構象多態(tài)性分析服務方面提供方位，性價

比高的解決方案。

收費標準

詳情請來電咨詢

服務周期

我公司在接受實驗委托1~2周內(nèi)完成實驗并交付實驗報告。

客戶須知（對材料的要求、注意事項）

• 客戶提供靶DNA，請?zhí)峁〥NA樣品電泳圖，并保證DNA樣品的有效性；客戶也可以提供含靶DNA的組織或細胞，需提供足量的新鮮樣品（DNA提取費用另計）。
• 核酸片段的大小: 用于SSCP分析的核酸片段越小，檢測的敏感性越高。對于<200 bp的片段，SSCP可發(fā)現(xiàn)其中70％的變異；對于300 bp左右的片段則只能發(fā)現(xiàn)其中50％的變異；而＞500 bp的片段，則僅能檢出10％~30％的變異，因此，<300bp，尤其是150 bp左右的核酸片段更適于SSCP分析。對于大于400bp的PCR產(chǎn)物就需要設法進一步處理，可以用限制性酶消化PCR產(chǎn)物，產(chǎn)生小于400 bp的DNA片段，再進行SSCP分析。
• 游離引物: 游離引物可能同PCR產(chǎn)物結合而改變其泳動率，即使游離引物量為6 nM都有明顯影響。因此，應盡可能除去游離引物。

  可以采用不對稱引物擴增方法，盡可能消耗多余的引物。也可以運用過柱或磁性球方法純化PCR產(chǎn)物。

  或者是稀釋PCR產(chǎn)物，減少游離引物的干擾。

• 假陰性: 一般認為，如沒有污染，PCR－SSCP分析不存在假陽性結果，但可能出現(xiàn)假陰性結果，

  后者是由于點突變引起的空間構象變化甚微，遷移率相差無幾所致，尤其是點突變發(fā)生在擴增片段的兩端時。

  如果有陽性和陰性對照，結果可以重復確定的突變帶是可信的，如果沒有陽性對照，應經(jīng)測序來確定其是否為突變帶。

  由于PCR－SSCP的不足之處主要是可能檢出假陰性結果。應通過設置陽性對照，摸索電泳條件，假陰性結果在很大程度上是

  可以避免的。但對未知基因變異的檢測，假陰性結果則難以完消除。

服務程序

1.可在我公司網(wǎng)站內(nèi)直接填寫《單鏈構象多態(tài)性服務訂單》發(fā)至我公司郵箱。

2.可下載訂單，填寫完成后，用傳真的形式發(fā)到我公司。

3.可電話聯(lián)系詳談有關具體要求和服務內(nèi)容。

4. 簽訂《單鏈構象多態(tài)性服務合同》，預付實驗總費用的50%作為實驗預付款。

5. 寄送：委托單位的試驗材料和試劑等均須采用te快專遞形式郵寄，有低溫要求的、固定要求的，按低溫保存、固定防碎方法運輸，以確保實驗物品的安可靠。

6. 實驗結束后，本公司將結果及時發(fā)給客戶，同時根據(jù)客戶要求處理相關材料：

• 具體實驗方法、步驟、所用試劑、儀器，電泳圖片以及相關分析數(shù)據(jù)等，實驗結果將以電子或書面形式提交給您。

7. 客戶應對所提供的材料及信息負責，如因客戶提供的材料及信息不準確而引起的實驗延誤或經(jīng)濟損失由客戶承擔。

服務咨詢及技術支持

·電話:

·Email:[email protected]

服務項目簡介

單鏈DNA段呈復雜的空間折疊構象，這種立體結構主要是由其內(nèi)部堿基配對等分子內(nèi)相互作用力來維持的，當有一個堿基發(fā)生改變時

，會影響其空間構象，使構象發(fā)生改變�？臻g構象有差異的單鏈DNA分子在聚丙烯酰胺凝膠中受排阻程度不同，因此，通過非變性聚

丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)，可以非常敏銳地將構象上有差異的分子分離開。該方法即為單鏈構象多態(tài)性(Single-Strand

Conformation Polymorphism，SSCP)分析。PCR-SSCP分析的基本程序為：手先PCR擴增te定靶序列，然后將擴增產(chǎn)物變性為單鏈

，進行非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳。

技術步驟

1.PCR擴增靶DNA;

2.將te異的PCR擴增產(chǎn)物變性，而后快速復性，使之成為具有一定空間結構的單鏈DNA分子;

3.將適量的單鏈DNA進行非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳;

4.后通過放射性自顯影、銀染或溴化乙錠顯色分析結果。若發(fā)現(xiàn)單鏈DNA帶遷移率與正常對照的相比發(fā)生改變，就可以判定該鏈構

象發(fā)生改變，進而推斷該DNA段中有堿基突變。

應用領域

廣泛用于癌基因和抗癌基因變異的檢測、遺傳病的致病基因分析以及基因診斷、基因制圖等領域。

應用實例

FAQ（Frequently Asked Questions）

1. 單鏈構象多態(tài)性分析有什么作用？

廣泛用于癌基因和抗癌基因變異的檢測、遺傳病的致病基因分析以及基因診斷、基因制圖等領域。

2. 在單鏈構象多態(tài)性實驗中，如何設置陽性對照，如果不存在陽性對照，實驗結果可信嗎？

實驗陰性對照一般選用正常細胞或菌株DNA的PCR擴增條帶，而陽性對照則是采用已知突變的正常細胞或菌株，如果不存在陽性對照，一般會應用測序來確定其是否為突變帶。