微圖案細(xì)胞有絲分裂高通量跟蹤表征系統(tǒng)，高通量細(xì)胞有絲分裂跟蹤表征系統(tǒng)

在一個(gè)平臺(tái)內(nèi)處理所有必要的圖像處理步驟，以檢測(cè)和分析通過(guò)有絲分裂接種在微圖案上的單個(gè)細(xì)胞。

通過(guò)使用延時(shí)熒光顯微鏡對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行可重復(fù)的分析，微圖案的使用已經(jīng)改變了動(dòng)態(tài)生物過(guò)程的研究。 借助微圖案，可以對(duì)數(shù)千個(gè)單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行高效并行成像，從而使該方法適合篩選項(xiàng)目。

對(duì)微模式上的單個(gè)有絲分裂細(xì)胞進(jìn)行高通量分析，從而準(zhǔn)確有效地允許從延時(shí)記錄中自動(dòng)確定紡錘體定位。

有絲分裂期間發(fā)生的動(dòng)態(tài)事件，包括主軸定位，可以使用延時(shí)顯微鏡進(jìn)行忠實(shí)監(jiān)測(cè)。 紡錘體定位是動(dòng)物發(fā)育和組織穩(wěn)態(tài)過(guò)程中細(xì)胞分裂軸正確定位的基礎(chǔ)。 在無(wú)脊椎動(dòng)物模型系統(tǒng)中進(jìn)行的正向遺傳和功能基因組篩選導(dǎo)致鑒定出被證明廣泛需要紡錘體定位的成分，包括在人類細(xì)胞中。 相比之下，直接在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中進(jìn)行篩選以識(shí)別對(duì)該過(guò)程重要的基因的篩選較少，并且沒(méi)有一個(gè)篩選依賴于對(duì)活細(xì)胞的監(jiān)測(cè)。 因此，很可能尚未完了解控制哺乳動(dòng)物系統(tǒng)中紡錘體定位的機(jī)制。 為了這一空白，我們提供了一個(gè)基于 siRNA 的屏幕，用于使用延時(shí)顯微鏡在人類細(xì)胞中定位中期紡錘體的新型調(diào)節(jié)器。

A：表達(dá) mCherry::histone 2B 的單個(gè) HeLa 細(xì)胞示例，生長(zhǎng)在涂有纖連蛋白 Alexa fluor 555 的 L 形微圖案上，并使用延時(shí)顯微鏡進(jìn)行監(jiān)測(cè)。頂部：延時(shí)顯微鏡實(shí)驗(yàn)的原始數(shù)據(jù)；時(shí)間以小時(shí)表示；底部：相應(yīng)的示意圖。請(qǐng)注意，示意圖中顯示的電池輪廓僅用于說(shuō)明目的，并未通過(guò)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行監(jiān)測(cè)。播種后，間期細(xì)胞在微圖案上定向，使細(xì)胞核位于 L 的兩個(gè)臂之間的中央。在有絲分裂中細(xì)胞變圓后，中期細(xì)胞板與 L 的臂成 ~ 45° 角定位L 形微圖案。乙：在涂有 L 形微圖案的 96 孔板中生長(zhǎng)的細(xì)胞視野示例，使用延時(shí)顯微鏡進(jìn)行監(jiān)測(cè)；時(shí)間以小時(shí)表示。在較低放大倍率視圖中用藍(lán)色插圖突出顯示的區(qū)域在下方放大，以說(shuō)明必須由 TRACMIT 區(qū)分的不同類別的細(xì)胞：綠色（可分析）：細(xì)胞正確定位在微圖案上并在記錄期間分裂；紅色 [ 1 ]，空：微圖案上沒(méi)有細(xì)胞；紅色 [ 2 ]，擁擠：微圖案上有一個(gè)以上的細(xì)胞；紅色 [ 3 ]，錯(cuò)誤位置：L 的一只手臂上的細(xì)胞；紅色 [ 4 ]，不分裂：細(xì)胞在記錄過(guò)程中不分裂。插圖中的比例尺 = 10μm