原核表達質(zhì)粒載體構(gòu)建服務(wù)

原核表達質(zhì)粒載體構(gòu)建服務(wù)

世聯(lián)博研生命科學(xué)服務(wù)中心提供you質(zhì)的原核表達質(zhì)粒載體構(gòu)建服務(wù)。大腸桿菌(E. coli)作為蛋白表達系統(tǒng)，具有兩個顯著特征：操作簡單，可在廉價的培養(yǎng)基中高密度生長。它的這些特征使其在科研應(yīng)用中成為高效表達異源蛋白常用的原核表達系統(tǒng)。

服務(wù)范圍

1. 世聯(lián)博研生命科學(xué)服務(wù)中心有自己的質(zhì)粒載體庫，以及Clontech、Invitrogen、Stratagen、Novagen、Promega、Amersham等公司的質(zhì)粒載體。均為實驗室常用質(zhì)粒載體。

如有需要，請聯(lián)系我們。

2. 世聯(lián)博研生命科學(xué)服務(wù)中心為客戶構(gòu)建或you化改造te定的載體，將目的基因裝載到te定的載體上，同時根據(jù)客戶需要，對載體進行you化（包括啟動子you化、篩選標(biāo)記you化、其它調(diào)控元件you化、密碼子you化以及表達you化篩選等），使得到的載體更適合蛋白表達與大腸桿菌內(nèi)其他操作。

收費標(biāo)準(zhǔn)

服務(wù)周期

1. 30個工作日左右，具體視客戶要求以及載體類型而定。

2. 如客戶需表達重組蛋白，詳情請查看蛋白質(zhì)表達服務(wù)，服務(wù)周期根據(jù)其蛋白表達純化的具體情況而定，請來電咨詢。

客戶須知（對材料的要求、注意事項）

1. 客戶需提供目的基因的名稱及基因序列，以及包含有目的基因的質(zhì)粒。如有引物也可提供，或者由公司代合成，費用另計�？蛻粢部商峁┹d體，常用載體世聯(lián)博研生命科學(xué)服務(wù)中心免費提供。

2. 本公司在收到客戶提供的材料信息后的弟二個工作日起開始實驗。

服務(wù)程序

1. 可在我公司網(wǎng)站內(nèi)直接填寫《原核表達質(zhì)粒載體構(gòu)建服務(wù)訂單》發(fā)至我公司郵箱。

2. 可下載訂單，填寫完成后，用傳真的形式發(fā)到我公司。

3. 可電話聯(lián)系詳談有關(guān)具體要求和服務(wù)內(nèi)容。

4. 簽訂《原核表達質(zhì)粒載體構(gòu)建服務(wù)合同》，預(yù)付實驗總費用的50%作為實驗預(yù)付款。

5. 寄送：委托單位的試驗材料和試劑等均須采用te快專遞形式郵寄，有低溫要求的、固定要求的，按低溫保存、固定防碎方法運輸，以確保實驗物品的安可靠。

6. 實驗結(jié)束后，本公司將結(jié)果及時發(fā)給客戶，同時根據(jù)客戶要求處理相關(guān)材料
A.對于原核表達載體構(gòu)建服務(wù)，我們提供：

原核表達載體；

構(gòu)建好的重組質(zhì)粒1μg；

含有重組質(zhì)粒的表達保種菌；

電泳圖譜，測序圖譜以及酶切圖以及完整的實驗報告。

B. 對于原核表達載體you化服務(wù)，我們提供：

原核表達載體；

載體改造后目的基因的測序結(jié)果，質(zhì)粒1ug以及含有重組質(zhì)粒的甘油菌；
提供誘導(dǎo)前后目的蛋白的SDS-PAGE電泳圖（考馬斯亮藍染色）；

完整的實驗報告。

7. 客戶應(yīng)對所提供的材料及信息負責(zé)，如因客戶提供的材料及信息不準(zhǔn)確而引起的實驗延誤或經(jīng)濟損失由客戶承擔(dān)。

服務(wù)咨詢及技術(shù)支持

·電話:

·Email: [email protected]

服務(wù)項目簡介

大腸桿菌(E. coli)作為表達載體，具有兩個顯著特征：操作簡單，可在廉價的培養(yǎng)基中高密度生長。它的這些特征使其在科研應(yīng)用中成為

高效表達異源蛋白常用的原核表達系統(tǒng)。

盡管大腸桿菌有眾多的you點，但并非每一種基因都能在其中高效表達。這歸因于每種基因都有其te的結(jié)構(gòu)、

mRNA的穩(wěn)定性和翻譯

效率、蛋白質(zhì)折疊的難易程度、宿主細胞蛋白酶對蛋白質(zhì)的降解、外源基因和E. coli在密碼子偏好

性上的主要差別以及蛋白質(zhì)對宿主的潛在毒性等等。

服務(wù)項目

1. 質(zhì)粒載體庫

原核表達、酵母表達載體、哺乳動物細胞表達載體等；Clontech、Invitrogen、Stratagen

、Novagen、Promega、Amersham等公司的質(zhì)粒載體。

2. 載體構(gòu)建及you化

（1）啟動子you化

（2） 篩選標(biāo)記you化

對載體上的Amp抗性、Kan抗性、Tet抗性及LacZ等地改造

（3） 其他調(diào)控元件you化

SD序列、起始密碼子、GC含量、RNA的二級結(jié)構(gòu)、目的蛋白的大小等，皆需考慮。

（4） 密碼子you化

E.coli不常用的密碼子

經(jīng)過以上you化，得到的載體更適于蛋白表達與大腸桿菌內(nèi)其他操作。將克隆的目的基因插入原核表達載體后，導(dǎo)入大腸桿菌用于表

達目的蛋白。原核蛋白表達系統(tǒng)是迄今為止為成熟可靠的蛋白表達系統(tǒng)，能快速表達各種不同來源蛋白。所制備的重組蛋白可用

于藥物篩選、結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究、細胞生物學(xué)研究、蛋白質(zhì)組學(xué)研究等的一系列領(lǐng)域。

FAQ（Frequently Asked Questions）

1. 原核表達載體的選擇上有什么要求嗎？

用什么樣的原核表達載體，應(yīng)注意以下幾點：1.載體的多克隆位點是否有與您目的片斷相同的酶切位點，且您的目的片斷插入后是否會產(chǎn)生移碼突變；2.您是否有相應(yīng)的載體及其表達宿主菌；3.您準(zhǔn)備采用什么方法純化目的蛋白，因不同載體表達蛋白后的純化方法并不一樣。

2. 原核表達載體構(gòu)建完成后，貴公司提供哪些結(jié)果？

實驗結(jié)束后，本公司將結(jié)果及時發(fā)給客戶，同時根據(jù)客戶要求處理相關(guān)材料：原核表達載體；構(gòu)建好的重組質(zhì)粒1μg；含有重組質(zhì)粒的表達保種菌；電泳圖譜，測序圖譜以及酶切圖以及完整的實驗報告。

3. 原核表達載體構(gòu)建客戶需要提供目的基因么？

客戶需提供目的基因的名稱及基因序列，以及包含有目的基因的質(zhì)粒。