• 細(xì)胞/組織的基因差異表達(dá)檢測(cè)，經(jīng)過不同處理樣本之間te定基因的表達(dá)差異(如藥物處理、物理處理、化學(xué)處理等)，te定基因在不同時(shí)段的表達(dá)差異以及cDNA芯片或差顯結(jié)果的確證。
• 組織/細(xì)胞樣品中基因拷貝數(shù)的確定，DNA或RNA的相對(duì)和絕對(duì)定量分析。包括病原微生物或病毒含量的檢測(cè)，轉(zhuǎn)基因動(dòng)植物轉(zhuǎn)基因拷貝數(shù)的檢測(cè)，RNAi基因失活率的檢測(cè)等。
• 基因分型，基因突變及多態(tài)性方面的研究。

• 抽提樣品DNA或RNA：細(xì)胞樣品 40元/樣本；組織樣本 60元/樣本
• 引物/TaqMan探針設(shè)計(jì)與合成：you化引物/探針設(shè)計(jì)及合成 （探針法）每個(gè)基因 1100元；you化引物設(shè)計(jì)及合成 （染料法）每個(gè)基因 100元
• RT反應(yīng)：RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA 25元/樣本
• 預(yù)實(shí)驗(yàn)：熒光PCR體系you化。確定熒光PCR反應(yīng)條件300元/基因
• 標(biāo)準(zhǔn)曲線制作：標(biāo)準(zhǔn)品為PCR產(chǎn)物300元 標(biāo)準(zhǔn)品為質(zhì)粒400元
• 正式實(shí)驗(yàn)：熒光PCR檢測(cè)。30元/反應(yīng)

1. 從細(xì)胞或te定組織中提取總RNA：實(shí)驗(yàn)周期為細(xì)胞或組織送到后的2個(gè)工作日。
2. 逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)周期為1個(gè)工作日。
3. 擴(kuò)增內(nèi)參和目的基因，實(shí)驗(yàn)周期為10個(gè)工作日。因?yàn)樵诿糠N不同細(xì)胞或組織中不同的基因的擴(kuò)增難度有差異，因此實(shí)驗(yàn)的時(shí)間會(huì)有所不同。我們一般會(huì)根據(jù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)程通知客戶，確�？蛻粼跁r(shí)間知道實(shí)驗(yàn)狀況。
4. 回收內(nèi)參和目的基因表達(dá)片段做標(biāo)準(zhǔn)樣，并檢測(cè)其擴(kuò)增效果： 實(shí)驗(yàn)周期為2個(gè)工作日。
5. 上機(jī)Real Time-PCR檢測(cè)得到結(jié)果并進(jìn)行處理： 實(shí)驗(yàn)周期為2個(gè)工作日。

1. 進(jìn)行mRNA表達(dá)量分析時(shí)，如果提供的材料為Total RNA，請(qǐng)寄送足量的并且保證純度的Total RNA(濃度在200 ng/μl以上，體積在20 μl 以上，純度A260/280在1.8-2.0間)。如果目的基因表達(dá)量低時(shí)，應(yīng)盡量提供更高濃度的Total RNA。
2. 如果提供的材料為細(xì)胞或組織，DNA、RNA的提取費(fèi)用另收（參照DNA/RNA抽提服務(wù)）。 同時(shí)應(yīng)保證材料新鮮，動(dòng)物細(xì)胞數(shù)為106以上，動(dòng)物組織為100 mg以上。
3. 目的基因信息(GenBank Acc、Gene ID、關(guān)鍵詞)，mRNA需說明具體剪接子及檢測(cè)范圍（公共區(qū)域或te異性區(qū)域）。
4. 引物設(shè)計(jì)的區(qū)域范圍(序列、5′端序列、3′端序列)。我們可免費(fèi)提供引物和TaqMan探針設(shè)計(jì)服務(wù)，合成費(fèi)用由客戶支付。
5. 確定準(zhǔn)確的靶序列數(shù)量，以準(zhǔn)確定量的靶序列作為參照，好是以質(zhì)粒的形式提供。檢測(cè)工作完畢后，本公司會(huì)將檢測(cè)結(jié)果和相關(guān)圖片反饋給客戶。
6. 客戶應(yīng)對(duì)所提供的材料及信息負(fù)責(zé)，如因客戶提供的材料及信息不準(zhǔn)確而引起的實(shí)驗(yàn)延誤或經(jīng)濟(jì)損失由客戶承擔(dān)。

1. 可在我公司網(wǎng)站內(nèi)直接填寫《Real Time-PCR服務(wù)訂單》發(fā)至我公司郵箱。
2. 可下載訂單，填寫完成后，用傳真的形式發(fā)到我公司。
3. 可電話聯(lián)系詳談?dòng)嘘P(guān)具體要求和服務(wù)內(nèi)容。
4. 簽訂《Real Time-PCR服務(wù)合同》，預(yù)付實(shí)驗(yàn)總費(fèi)用的50%作為實(shí)驗(yàn)預(yù)付款。
5. 寄送：委托單位的試驗(yàn)材料和試劑等均須采用te快專遞形式郵寄，有低溫要求的、固定要求的，按低溫保存、固定防碎方法運(yùn)輸，以確保實(shí)驗(yàn)物品的安可靠。
6. 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，本公司將結(jié)果及時(shí)發(fā)給客戶，同時(shí)根據(jù)客戶要求處理相關(guān)材料。
7. 客戶應(yīng)對(duì)所提供的材料及信息負(fù)責(zé)，如因客戶提供的材料及信息不準(zhǔn)確而引起的實(shí)驗(yàn)延誤或經(jīng)濟(jì)損失由客戶承擔(dān)。

• 電話:
• Email: [email protected]

Real-time PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)累積實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。利用熒光信號(hào)的變化實(shí)時(shí)檢測(cè)PCR擴(kuò)增反應(yīng)中每一個(gè)循環(huán)擴(kuò)增產(chǎn)物量的變化，通過Ct值和標(biāo)準(zhǔn)曲線的分析對(duì)起始模板進(jìn)行定量分析。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)具有te異性強(qiáng)，有效解決了PCR污染問題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，做到PCR每循環(huán)一次就收集一個(gè)數(shù)據(jù)，建立實(shí)時(shí)擴(kuò)增曲線，準(zhǔn)確地確定Ct值，從而根據(jù)Ct值確定起始DNA拷貝數(shù)，做到了真正意義上的DNA定量。

一、RNA的提取
二、DNase I 消化樣品RNA 中的DNA
三、RNA瓊脂糖凝膠電泳
四、RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA
Real-Time PCR引物設(shè)計(jì)的要求
① Tm=55~65 ℃
② GC=30~80%
③ PCR擴(kuò)增產(chǎn)物長度：引物的產(chǎn)物大小不要太大，一般在80~300 bp之間都可。
④ 引物的退火溫度要高，一般要在60 ℃以上。
五、cDNA與引物質(zhì)量檢測(cè)
選擇te異性好，擴(kuò)增效率高的引物作為實(shí)時(shí)熒光使用引物。
六、利用相對(duì)定量的方法分析目的基因表達(dá)量的情況：
常用的看家基因有β-actin，GAPDH，18S rRNA
七、定量 PCR檢測(cè)
八、擴(kuò)增曲線和溶解曲線
溶解曲線部為單峰表明為te異性擴(kuò)增，熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個(gè)階段：熒光背景信號(hào)階段，熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。