近日，美國巴爾的摩退伍軍人事務(wù)醫(yī)院和馬里蘭大學(xué)醫(yī)學(xué)院的Amit Golding等人在《Journal of Immunological Methods》雜志上發(fā)表文章，應(yīng)用成像流式細(xì)胞術(shù)來鑒定轉(zhuǎn)錄因子Forkhead box O1（FOXO1）的細(xì)胞內(nèi)定位。

作者首先建立了一個(gè)模型系統(tǒng)來監(jiān)控人淋巴瘤細(xì)胞系HuT102中的FOXO1。通過傳統(tǒng)的細(xì)胞組分分離和Western blott方法，作者發(fā)現(xiàn)這個(gè)模型能夠檢測到FOXO1的定位。在細(xì)胞未經(jīng)處理時(shí)，它主要位于細(xì)胞核中。之后利用佛波酯/離子霉素（PMA/I）處理，F(xiàn)OXO1的表達(dá)逐漸轉(zhuǎn)移到細(xì)胞質(zhì)。而Akt VII抑制劑的處理可逆轉(zhuǎn)這種作用。

然而，這種方法的每個(gè)條件都至少需要3x106個(gè)細(xì)胞，才能準(zhǔn)確了解蛋白定位，并且它本身無法解析異質(zhì)性的細(xì)胞群。考慮到這些限制，作者認(rèn)為成像流式細(xì)胞術(shù)可能是一種更好的替代方法。

在此，他們利用Amnis Imagestream Mark II成像流式細(xì)胞儀（默克公司）和40倍物鏡來收集每個(gè)樣品的10，000個(gè)細(xì)胞數(shù)據(jù)。他們利用活細(xì)胞/死細(xì)胞染料來分離活細(xì)胞，利用DAPI來鑒定細(xì)胞核，并利用CD4受體檢測抗體以及細(xì)胞內(nèi)染色來確定FOXO1的定位。

作者通過計(jì)算皮爾森相關(guān)系數(shù)，利用DAPI和FOXO1的信號來產(chǎn)生相似性得分，表明FOXO1主要定位在細(xì)胞核。這一基線建立后，作者開展PMA/I處理、AKT VII抑制劑處理或兩者疊加處理，并再次鑒定FOXO1的定位。然后利用人外周血單核細(xì)胞來觀察PMA/I處理對CD4和CD8細(xì)胞群的作用。

總之，這些結(jié)果表明成像流式細(xì)胞術(shù)是確定FOXO1定位的可靠系統(tǒng)。與其他成熟方法相比，它需要的細(xì)胞量比較少，并且能夠在單細(xì)胞亞群中定位FOXO1的表達(dá)。這對于淋巴細(xì)胞減少癥的患者來說至關(guān)重要。此外，這種技術(shù)可在384孔/1536孔板中實(shí)現(xiàn)許多高通量的應(yīng)用。

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