對癌癥的分子復(fù)雜性和致癌驅(qū)動因素的作用日益深入的理解已經(jīng)使得癌癥的治療越來越有針對性。通常在診斷時，醫(yī)生利用獲得的腫瘤組織進(jìn)行活組織檢查從而獲得靶向治療所需的分子分析結(jié)果。然而，腫瘤組織活檢有幾個局限性，包括手術(shù)的創(chuàng)傷和由于腫瘤異質(zhì)性或者低腫瘤細(xì)胞比例導(dǎo)致假陰性結(jié)果的風(fēng)險。另外，多達(dá)49％的晚期或轉(zhuǎn)移性非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）沒有獲取的腫瘤組織。因此，通過體液如血液或尿液進(jìn)行的腫瘤相關(guān)突變的非侵入性檢測是基于組織活檢方法的最有吸引力的替代方法。

循環(huán)腫瘤DNA（ctDNA）是從腫瘤部位釋放到癌癥患者血液中的循環(huán)無細(xì)胞DNA（cfDNA）的組成部分，ctDNA作為非小細(xì)胞肺癌和其他癌癥的腫瘤組織活檢的替代物，具有巨大的應(yīng)用前景。這使得最近美國和歐洲的血液EGFR伴侶診斷試驗的監(jiān)管批準(zhǔn)。此外，已經(jīng)開發(fā)出高度敏感和選擇性的技術(shù)來解決癌癥患者血液中經(jīng)常發(fā)現(xiàn)的相對于野生型的極低比例的腫瘤來源的突變DNA的檢測。在這方面，基于數(shù)字PCR技術(shù)的BEAMing（Beads，、Emulsification、Amplification、Magnetics）技術(shù)可以識別低至0.02%突變等位基因（MAF）的突變，已被證明是最敏感的ctDNA的突變檢測，并且與下一代測序（NGS）技術(shù)達(dá)到了相似的水平（0.05％MAF）。除此之外，還需克服的困難是患者的體細(xì)胞基因的改變帶來的少量的ctDNA檢測是目前的腫瘤生物學(xué)無法完成的?？蓹z測ctDNA的患者的比例因其適應(yīng)癥、疾病階段、腫瘤負(fù)荷和其他臨床特征而異。在NSCLC中，EGFR激活突變的患者（包括外顯子19缺失和外顯子21的L858R點突變）是可以接受各種EGFR抑制劑治療的，并獲得FDA批準(zhǔn)的首例液體活檢項目。在使用第三代EGFR酪氨酸激酶抑制劑（EGFR-TKI）來治療EGFR T790M抗性突變的復(fù)發(fā)性NSCLC患者時，由于血液中ctDNA的水平有限，T790M檢測的假陰性率經(jīng)常>30％。第一個FDA批準(zhǔn)的Rochecobas？EGFR Mutation Test v2 for T790M的靈敏度僅為58.4％，特異性為80.4％。

克服ctDNA突變檢測數(shù)量限制的一個手段可能會是來自外泌體的腫瘤相關(guān)RNA。外泌體是由活細(xì)胞（包括腫瘤細(xì)胞）釋放的小囊泡，并攜帶RNA、DNA和蛋白質(zhì)。使用外泌體RNA（exoRNA）來識別腫瘤起源的體細(xì)胞突變先前已被證明，但exoRNA和cfDNA二者的組合提取（exoNA）尚未被闡述，也沒有闡述比單獨使用ctDNA的優(yōu)勢。外泌體的一個重要特征是，存在于血漿和其他生物流體的核酸是在這些囊泡的內(nèi)腔中的，這些核酸結(jié)構(gòu)完好，免受核酸酶的消化，是良好質(zhì)量的RNA。此外，外泌體從由活細(xì)胞中主動釋放出來，而ctDNA則是通過細(xì)胞凋亡或壞死從死亡細(xì)胞中釋放出來的。研究人員推測，外泌體RNA上存在的額外突變以及它們來源于活躍生長的腫瘤細(xì)胞可能有助于改進(jìn)目前基于血漿的EGFR突變檢測。

在這項發(fā)表于Annals of Oncology雜志（IF 11.854）的研究中，研究人員分析了來自IIIB和IV期NSCLC患者參加TIGER-X試驗（第三代EGFR抑制劑rociletinib的1/2期臨床試驗，編號NCT01526928）的84個血漿樣品。研究人員分離外泌體和ctDNA，并提取核酸，并使用有針對性的NGS分析（EXO1000）來篩選EGFR突變。該研究的主要目的是檢測同時提取exoRNA和ctDNA是否會增加拷貝數(shù)和EGFR突變檢測的敏感性，尤其是在通過腫瘤活組織檢查已知EGFR突變陽性的患者中，不通過只單獨的分析ctDNA鑒定EGFR突變檢測。研究人員將數(shù)據(jù)與匹配的組織數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，并匹配先前用BEAMing獲得的ctDNA結(jié)果。此外他們通過分析治療15天后收集的血漿，檢測了治療期間EGFR突變水平的變化是否與治療結(jié)果相關(guān)。

研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，對于exoNA（exoRNA和cfDNA二者的組合），檢測EGFR激活突變的靈敏度為98％，EGFR T790M為90％。BEAM對ctDNA的敏感性分別為82％，T790M為84％。在一胸內(nèi)轉(zhuǎn)移亞組患者中（M0/M1a； n=21），利用exoNA的檢測，EGFR激活突變的檢測靈敏度從26％上升到74％（p = 0.003），T790M的靈敏度從19％上升到31％。綜上所述，exoRNA和ctDNA的聯(lián)合檢測增加了血漿中EGFR突變檢測的敏感性，并在已知具有低水平ctDNA的M0/M1a患者中看到檢測的改善，該方法也對于僅基于ctDNA的突變檢測提出了新的挑戰(zhàn)。(世聯(lián)博研(Bioexcellence)世聯(lián)博研Bioexcellence）