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        體外診斷之你可能不知道的側(cè)向?qū)游黾夹g(shù)熱點

        來源:生物谷

        免疫層析條.png

        側(cè)向?qū)游黾夹g(shù)是20世紀90年代在單克隆抗體技術(shù)、膠體金免疫層析技術(shù)和新材料技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一項新型體外診斷技術(shù),具有快速、簡便、單人份檢測、經(jīng)濟的優(yōu)點(圖1),現(xiàn)已廣泛應用于醫(yī)學檢測、食品質(zhì)量監(jiān)測、環(huán)境監(jiān)測、農(nóng)業(yè)和畜牧業(yè)、出入境檢驗檢疫、法醫(yī)定案等領(lǐng)域。


        側(cè)向?qū)游黾夹g(shù)以大孔徑的微孔濾膜(NC膜、硝酸纖維素膜)為載體,將特異性的抗原或抗體固定在NC膜上,當待測樣品加到試紙條一端的樣品墊上后,通過毛細作用側(cè)向移動,與結(jié)合墊上的膠體金或微球標記的試劑發(fā)生特異的免疫反應,再移動到NC膜上,被固定在NC膜表面的抗原或抗體捕獲,聚集在檢測帶上,通過目測硝酸纖維素表面標記物(膠體金或乳膠顆粒)的光反射信號的密度得到直觀的顯色結(jié)果。其它未結(jié)合的標記物則越過檢測帶,流入吸水墊中,達到自動分離的目的(圖2)。


        隨著免疫檢測技術(shù)的飛速發(fā)展,定量、高靈敏度、多元檢測、系統(tǒng)集成化,開始成為IVD領(lǐng)域新的研究方向熱點,與傳統(tǒng)的ELISA和膠體金定性側(cè)向?qū)游鰴z測相比,基于微球的定量側(cè)向?qū)游鰴z測具有穩(wěn)定性好,線性范圍寬,靈敏度高等諸多優(yōu)點。制備Estapor納米微球的常用材質(zhì)為聚苯乙烯(PS)或者聚苯乙烯與其他化合物如二乙烯苯組成的復合材料。對于微球表面無任何功能基團修飾的微球,抗原或抗體通過被動吸附作用固定在微球表面,工藝簡單。對于有功能基團修飾的微球,抗原/抗體可通過共價交聯(lián)的方式固定在微球表面。抗原/抗體的共價交聯(lián)方法主要有兩種,一種是兩步法,交聯(lián)前微球需先激活,例如-COOH羧基修飾的微球可用NHS/EDC活化;另一種是一步法,微球交聯(lián)前只需更換緩沖液的pH值即可活化,操作十分方便,如氯甲基、甲苯磺?;h(huán)氧基修飾的微球就屬于此類。抗原或抗體偶聯(lián)到微球表面后可通過離心、透析或者超濾去除未交聯(lián)的抗體/抗原 ,然后再使用超聲重新分散。 (生物谷 世聯(lián)博研Bioexcellence)


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