在當(dāng)下這種高負荷的科研工作環(huán)境下，或許您需要的是一劑輕松又不失嚴謹?shù)牧妓?，近年來外泌體（exosome）越來越受到醫(yī)學(xué)研究人員的重視，被認為是疾病標志物早期診斷或監(jiān)測的潛在新途徑，對于循環(huán)外泌體RNA（尤其是miRNA），已經(jīng)成為檢測早期癌癥的最具前景的生物標志物之一，而lncRNA作為當(dāng)下的另一個研究熱點，尚不確定血漿中腫瘤細胞來源的外泌體lncRNA是否能有效診斷早期癌癥。

今天小編要為您分享來自廈門大學(xué)中山醫(yī)院院長蔡建春教授課題組等最近發(fā)表于《Mol Cancer》的一篇有關(guān)胃癌患者循環(huán)外泌體lncRNAs（lncUEGC1）對早期胃癌（EGC）診斷價值的文章，介紹一下外泌體lncRNA生物標志物鑒定的核心策略。

先來了解外泌體lncRNA研究路線

為什么要研究早期胃癌中外泌體的lncRNA？

胃癌（GC）在癌癥相關(guān)死亡的人數(shù)中排名第二，它是包括亞洲范圍包括中國在內(nèi)的最致命的一類癌癥。那么導(dǎo)致胃癌發(fā)生的因素有哪些呢？目前，除了遺傳因素和環(huán)境因素外，在當(dāng)今這個繁忙又快節(jié)奏的社會環(huán)境下，不良的飲食習(xí)慣以及繁重的工作壓力等均與胃癌的發(fā)生息息相關(guān)，甚至使得胃癌呈現(xiàn)年輕化傾向。絕大多數(shù)胃癌屬于腺癌，早期無明顯癥狀，常與胃炎、胃潰瘍等胃慢性疾病癥狀相似，易被忽略，我國當(dāng)下胃癌的早期診斷率仍較低，提高胃癌的早期診斷和治療生存率是科學(xué)家研究的一個出發(fā)點。那么關(guān)于胃癌的早期診斷的方法有什么新的研究進展嗎？研究者們將目光聚焦到了外泌體中的lncRNA，因為尚不確定血漿中腫瘤細胞來源的外泌體lncRNA是否能有效診斷早期癌癥，同時有望提高早期診斷的敏感性和特異性。

基于外泌體RNA測序結(jié)果篩選并鑒定EGC特異性外泌體RNA

在該研究中，采用逐步離心、超速離心法等途徑制備外泌體，分離了來自5個健康個體、10個I期GC患者的血漿以及來自4個人原代胃上皮細胞（HPSEC）和4個胃癌細胞（GCC）的培養(yǎng)基的外泌體。經(jīng)純化的外泌體RNA通過RNA-seq進行表達譜分析，以鑒定EGC特異性外泌體lncRNA。基于RNA測序數(shù)據(jù)分析，發(fā)現(xiàn)6個基因在兩組中均顯著上調(diào)，專注于其中2個具有最高的上調(diào)倍數(shù)變化和表達水平的EGC特異性外泌體lncRNAs，并將它們命名為lncUEGC1和lncUEGC2。

基于RNA測序結(jié)果篩選出EGC特異性外泌體lncRNA

qRT-PCR驗證測序數(shù)據(jù)的準確性

采用qRT-PCR的方法進一步驗證這兩個外泌體lncRNAs在I期、II期 GC患者以及健康個體的表達情況，同時也驗證了在GCC和HPSEC中的表達?？傮w來看，這些結(jié)果與RNA-seq數(shù)據(jù)一致，表明lncUEGC1和lncUEGC2可能具有作為EGC特異性外泌體lncRNA標志物的潛力，用于早期非侵入性GC診斷。

外泌體lncUEGC1和lncUEGC2在EGC樣本和GCC中的表達模式

循環(huán)lncUEGC1和lncUEGC2在EGC樣本中的穩(wěn)定性測試

考慮到血漿中循環(huán)RNA可能具有較差的穩(wěn)定性而影響診斷結(jié)果，為了檢測lncUEGC1和lncUEGC2在血漿中的穩(wěn)定性，用RNase直接處理20個I期GC樣本的血漿樣品。在用或不用RNase處理的血漿之間，總循環(huán)lncUEGC1的相對血漿濃度沒有顯著差異（P = 0.4154）。然而，在RNase處理下血漿總LnCuEGC2的相對血漿濃度下降約2倍（P＝0.0305）。還評估了超速離心后外泌體耗盡的血漿中的lncUEGC1和lncUEGC2水平。相對于外泌體耗盡的血漿，lncUEGC1在外泌體中的表達水平豐富，但是lncUEGC2的表達沒有顯著差異，揭示了一部分lncUEGC2未被包裹在外泌體內(nèi)。此外，針對I期GC患者該項研究又分析了在血漿外泌體RNA和血漿總循環(huán)RNA中相對lncUEGC1和lncUEGC2表達水平的相關(guān)性。根據(jù)計算的相關(guān)系數(shù)，在血漿外泌體RNA和血漿總循環(huán)RNA中相對lncUEGC1和lncUEGC2的表達水平呈正相關(guān)關(guān)系?？梢耘袛鄮缀跛械难獫{lncUEGC1被包裹在外泌體中，從而防止被RNase降解，具有較理想的穩(wěn)定性。

外泌體lncUEGC1和lncUEGC2在EGC樣本和GCC中的穩(wěn)定性檢測

CEA、lncUEGC1和lncUEGC2在驗證集合中的表達模式和診斷準確性

為了確定外泌體lncUEGC1和lncUEGC2以及常規(guī)腫瘤標志物CEA對EGC檢測的診斷能力，該研究檢測了血漿外泌體lncUEGC1和lncUEGC2表達水平以及血清CEA水平，以區(qū)分EGC患者、癌前CAG病變患者和健康對照者。建立受試者工作特征曲線（ROC曲線）以評估診斷的準確性，由于目前使用的液體活檢指標難以區(qū)分早期胃癌和癌前病變，該項研究進一步建立了血漿外泌體lncUEGC1和lncUEGC2以及血清CEA的ROC曲線來區(qū)分CAG患者（n = 18）和I期GC患者（n = 23），該指標可以有效地區(qū)分EGC和癌前病變。研究表明，外泌體lncUEGC1可能有望用于EGC診斷的高靈敏度，穩(wěn)定性和非侵入性生物標志物而被開發(fā)。

CEA，lncUEGC1和lncUEGC2在驗證集中的表達模式和診斷值

此項研究首次使用外泌體lncRNA測序系統(tǒng)徹底篩選潛在的EGC生物標記物。同時這項研究也揭示了外泌體的獨特性質(zhì)，包括它們嵌入癌癥來源的RNA的能力、在循環(huán)過程中的穩(wěn)定性以及可重復(fù)檢測性。

針對外泌體RNA生物標志物的研究挑戰(zhàn)，銳博生物提供從樣品制備、測序到功能研究的整體解決方案，涵蓋了從外泌體抽提與鑒定（Ribo？ Exosome Isolation Reagent、粒徑檢測、表征蛋白流式檢測）、外泌體功能驗證（EdU-EU細胞檢測試劑盒）、外泌體miRNA/lncRNA測序到外泌體功能分子驗證（FISH試劑盒、ChIRP Probe、RNAi體外體內(nèi)產(chǎn)品、RBP siRNA library）以及外泌體與功能分子的動物實驗（裸鼠移植瘤模型構(gòu)建、動物活體成像）的整體產(chǎn)品與服務(wù)，為幫助您解決在研究或?qū)嶒炛杏龅降奶魬?zhàn)提供服務(wù)。

關(guān)于外泌體（Exosomes）

外泌體來源于晚期核內(nèi)體（也稱為多囊泡體）的囊泡，是由活細胞分泌而來，是一類大小介于30-200nm的含有DNA、RNA、蛋白質(zhì)和脂類的微囊，幾乎所有類型的細胞都能分泌，廣泛存在于血清、血漿 、尿液等各種體液中。Exosomes 參與調(diào)控重要的細胞生理活動，在免疫應(yīng)答、凋亡、血管生成、炎癥反應(yīng)、凝結(jié)過程中的作用均有報道，成為多種疾病治療的潛在靶點、早期診斷標記物、靶向藥物載體等，成為近年來生命科學(xué)及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的研究熱點。(生物谷Bioon.com）

小編推薦會議  2019（第四屆）外泌體與疾病研討會

http://meeting.bioon.com/2019Exosomes？__token=liaodefeng