幾周前，Allogene宣布將在加利福尼亞州紐瓦克建造一個(gè)118000平方英尺的細(xì)胞治療制造工廠，以支持其Allo CAR-T候選療法產(chǎn)品供應(yīng)。

同時(shí)，Allogene的首席技術(shù)官Alison Moore在一份聲明中說道，“建立最先進(jìn)的制造工廠是我們更快、更可靠、更大規(guī)模地提供現(xiàn)成細(xì)胞療法的戰(zhàn)略的核心?！?/p>

這一消息一經(jīng)發(fā)布，業(yè)內(nèi)關(guān)于同種異體CAR-T更是議論紛紛。這討論的熱情稍稍褪去，近日，法國細(xì)胞療法公司Cellectis又宣布，將在北卡羅來納州建造一個(gè)82,000平方英尺的商業(yè)制造工廠，以生產(chǎn)其同種異體CAR-T產(chǎn)品，并已簽署了租賃協(xié)議。

據(jù)Cellectis稱，計(jì)劃建于北卡羅來納州羅利的工廠名為IMPACT，將負(fù)責(zé)臨床和商業(yè)生產(chǎn)。該公司還開始在法國巴黎建造一個(gè)14,000平方英尺的工廠，為其UCART產(chǎn)品提供原料供應(yīng)。

根據(jù)美國食品藥品管理局（FDA）和歐洲藥品管理局（EMA）的指導(dǎo)原則，這些新的制造工廠將允許GMP制造臨床和商業(yè)產(chǎn)品，并將完全配備以支持監(jiān)管批準(zhǔn)。

之前與許多生物技術(shù)公司一樣，Cellectis依靠合同制造商為其UCART產(chǎn)品提供臨床試驗(yàn)產(chǎn)品和原材料供應(yīng)。然而，去年該公司決定將制造，這也是細(xì)胞療法的關(guān)鍵一步，在內(nèi)部進(jìn)行。

Cellectis首席執(zhí)行官André Choulika在3月7日的一份聲明中說到：“現(xiàn)在正是創(chuàng)建自己的供應(yīng)能力的最佳時(shí)機(jī)。Cellectis將獲得制造業(yè)務(wù)的自主權(quán)、控制權(quán)以及專門知識(shí)，使我們能夠繼續(xù)建立競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì)，并繼續(xù)保持在領(lǐng)域中的領(lǐng)先地位。”

Cellectis作為一家走在通用CAR-T研發(fā)前沿的公司，已經(jīng)被業(yè)界廣泛熟知和關(guān)注。Cellectis的TALEN基因編輯技術(shù)和開創(chuàng)性的電轉(zhuǎn)系統(tǒng)PulseAgile為開發(fā)安全有效的下一代免疫療法奠定了基礎(chǔ)。UCART通過TALEN基因編輯技術(shù)，敲除TCR等相關(guān)基因，避免移植物抗宿主病。

Cellectis公司UCART簡(jiǎn)介

UCART制造流程（圖片來源：cellectis.com）

UCART的生產(chǎn)制造

之前對(duì)Cellectis的關(guān)注點(diǎn)一直放在新療法和臨床試驗(yàn)進(jìn)展上，今天我們將看看通用CAR-T生產(chǎn)制造相關(guān)的內(nèi)容。

UCART的生產(chǎn)過程與自體CART大體上類似，不同點(diǎn)在于UCART的原材料是健康捐獻(xiàn)者的血液而非病人自身的血液，其次UCART生產(chǎn)過程中多了一步，引入基因編輯工具敲除某些特定基因。

在目前的自體型CART生產(chǎn)工藝中，Kite的工藝最為簡(jiǎn)便，周期也最短，為10天左右；Novartis的生產(chǎn)工藝最為標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)過后期優(yōu)化后周期仍有22天；Juno的生產(chǎn)周期在14-18天左右。目前UCART的GMP生產(chǎn)周期大約為19天，其具體過程如下。

UCART GMP生產(chǎn)過程

UCART初始材料：健康捐贈(zèng)者細(xì)胞

首先從健康的美國捐獻(xiàn)者血液中分離單核細(xì)胞（MNCs），這些捐獻(xiàn)者血液來自FDA批準(zhǔn)的，加利福尼亞州批準(zhǔn)的，美國血庫協(xié)會(huì)（AABB）認(rèn)可的，臨床試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)（CLIA）認(rèn)證的血庫。

所有的捐獻(xiàn)者都需要經(jīng)過挑選，篩選（采集前的14天內(nèi)）和檢測(cè)（采集的當(dāng)天）。所有的人類細(xì)胞的捐獻(xiàn)，獲得，檢測(cè)，加工和存儲(chǔ)都遵循歐盟和美國的相關(guān)法規(guī)和指導(dǎo)意見。

從MNCs中分離淋巴細(xì)胞（一般的產(chǎn)量大于4x10^9 cells），一次UCART生產(chǎn)的初始細(xì)胞數(shù)目通常為收集到細(xì)胞的1/5-1/3（10^9 cells左右）。

Day1到Day4：第一次T細(xì)胞改造（慢病毒感染）

使用識(shí)別CD3/CD28的抗體偶聯(lián)beads激活T細(xì)胞。使用GMP級(jí)別的，由第三代慢病毒載體包裝的慢病毒感染激活的T細(xì)胞，使得RQR8與相應(yīng)的CAR在T細(xì)胞中表達(dá)。

Day5:第二次細(xì)胞改造（TALEN介導(dǎo)的基因編輯）

將GMP級(jí)別的TALEN編碼的mRNA通過電轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)入到經(jīng)過第一次改造的T細(xì)胞中，使TALEN瞬時(shí)表達(dá)。

TALEN能夠識(shí)別和切割TRAC與CD52基因組DNA，形成的DNA雙鍵裂斷由非精準(zhǔn)的NHEJ修復(fù)方式修復(fù)從而導(dǎo)致TRAC與CD52基因的敲除。

Day6到Day17：細(xì)胞擴(kuò)增

在可控的培養(yǎng)系統(tǒng)中將細(xì)胞擴(kuò)增到10^11 cells左右。

 Day18-19：細(xì)胞純化與分裝

使用抗體-磁珠偶聯(lián)的beads，分選純化出TCRαβ陰性的T細(xì)胞。（此為一個(gè)重要的放行標(biāo)準(zhǔn)）

細(xì)胞的分裝與凍存。每個(gè)產(chǎn)品一般都會(huì)有2-3種劑量形式，用以滿足可能的劑量遞增需求。

UCART的QC標(biāo)準(zhǔn)

雖然現(xiàn)在還沒有詳盡的法規(guī)來規(guī)定CART產(chǎn)品的QC標(biāo)準(zhǔn)，但是CART產(chǎn)品還是需要一系列的質(zhì)量檢測(cè)。其中產(chǎn)品的純度，即≥97%的TCRαβ陰性細(xì)胞是一個(gè)重要的放行標(biāo)準(zhǔn)。此外產(chǎn)品的無菌性，內(nèi)毒素，支原體，以及是否含有可復(fù)制的慢病毒都需要進(jìn)行一系列檢測(cè)。產(chǎn)品對(duì)于目標(biāo)細(xì)胞的響應(yīng)（包括相關(guān)細(xì)胞因子的釋放與細(xì)胞殺傷活性）也應(yīng)該被檢測(cè)。

UCART的QC標(biāo)準(zhǔn)

同種異體CAR-T相對(duì)于自體CAR-T的優(yōu)勢(shì)不必贅述，當(dāng)然也必然是在有效克服同種異體CAR-T更高挑戰(zhàn)的前提下，如更大的免疫原性風(fēng)險(xiǎn)和排斥反應(yīng)，編輯效率與細(xì)胞毒性的問題等。（生物谷Bioon.com）

小編推薦會(huì)議 2019（第十屆）細(xì)胞治療國際研討會(huì)

http://meeting.bioon.com/2019cell-therapies？__token=liaodefeng