迄今為止，美國和歐盟已經(jīng)相繼批準(zhǔn)了兩種CAR-T細(xì)胞療法，分別是諾華與賓夕法尼亞大學(xué)合作開發(fā)的Kymriah?（CTL019），用于治療急性淋巴細(xì)胞白血病（ALL），以及 吉利德旗下公司Kite制藥開發(fā)的Yescarta?，用于治療治療復(fù)發(fā)或難治性彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤（DLBCL）和原發(fā)性縱隔大B細(xì)胞淋巴瘤（PMBCL）成人患者。

盡管CAR-T的安全性和有效性已得到很好的驗(yàn)證，然而，由于產(chǎn)品的異質(zhì)性、制造復(fù)雜和缺乏標(biāo)準(zhǔn)化的全球監(jiān)管，CAR-T仍然是局限于數(shù)百名患者的精品療法。

實(shí)現(xiàn)大規(guī)模CAR-T生產(chǎn)是提高其可及性的重要課題，為此，標(biāo)準(zhǔn)化各國的CAR-T制造和法規(guī)勢(shì)在必行且具有挑戰(zhàn)性。

近日，江南大學(xué)的戴曉峰教授和解放軍總醫(yī)院的韓為東教授作為共同通訊作者在Biotechnology Advances（SCI一區(qū)，IF=11.452）發(fā)表了一篇題為：“Standardizing CAR-T therapy: Getting it scaled up（標(biāo)準(zhǔn)化CAR-T療法：擴(kuò)大規(guī)模）”的文章，圍繞限制CAR-T的生產(chǎn)規(guī)模的問題，回顧了當(dāng)下的狀況和挑戰(zhàn)。

標(biāo)準(zhǔn)化CAR-T制造

基因工程T細(xì)胞的臨床制備首先需要采集患者外周血單個(gè)核細(xì)胞，對(duì)其進(jìn)行增殖，然后進(jìn)行基因修飾和擴(kuò)增，并在輸注前進(jìn)行篩選和/或冷凍保存。鑒于CAR-T生產(chǎn)原料的多樣性和現(xiàn)有的各種培養(yǎng)技術(shù)，修飾T細(xì)胞最終的質(zhì)量變化仍然是一個(gè)有待解決的重要問題。

CAR-T細(xì)胞生產(chǎn)的經(jīng)典工作流程（圖片來源：Biotechnology Advances）

戴曉峰教授和韓為東教授指出，以下7個(gè)因素的標(biāo)準(zhǔn)化對(duì)于大規(guī)模CAR-T生產(chǎn)的成功是決定性的：

    制造過程

    原料

    病毒載體

    輔助試劑

    質(zhì)量控制

    治療后免疫監(jiān)測(cè)

    政府監(jiān)管

7個(gè)決定性因素（圖片來源：Biotechnology Advances）

制造過程

制造過程應(yīng)該追求（1）生產(chǎn)安全且臨床上有效的細(xì)胞產(chǎn)品；（2）可擴(kuò)展性，以便更多的患者可以從這些技術(shù)中受益而不犧牲產(chǎn)品的質(zhì)量和可再生產(chǎn)性。

為了實(shí)現(xiàn)這一目標(biāo)，文中倡議使用封閉式自動(dòng)化系統(tǒng)和質(zhì)量源于設(shè)計(jì)（quality-by-design，QbD）理念。

封閉式自動(dòng)化系統(tǒng)

實(shí)施封閉的培養(yǎng)系統(tǒng)是一個(gè)防止產(chǎn)品污染和保持無菌環(huán)境的可靠策略。為此，可以將關(guān)鍵試劑的生產(chǎn)程序納入一個(gè)封閉系統(tǒng)，或者，建立良好的跟蹤供應(yīng)鏈和技術(shù)，使原料生產(chǎn)能夠在封閉系統(tǒng)中完成。

從細(xì)胞制備、篩選、培養(yǎng)、擴(kuò)展、轉(zhuǎn)導(dǎo)到配方，自動(dòng)化在標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)過程中有著特殊的用途，目前已經(jīng)有一些公司建立相應(yīng)的技術(shù)平臺(tái)。

幾種CAR-T制造平臺(tái)的對(duì)比

（圖片來源：Biotechnology Advances）

- 中國生物技術(shù)公司博雅控股（BoyaLife）建立一個(gè)集臨床級(jí)細(xì)胞分離、純化、培養(yǎng)、洗滌和配方于一體的CAR-TXpress?平臺(tái)，這是一種緊湊的單元操作裝置。

- 德國美天旎生物（Miltenyi Biotec）自主研發(fā)的CliniMACS? Prodigy是一個(gè)集細(xì)胞分選、擴(kuò)增、轉(zhuǎn)導(dǎo)、培養(yǎng)等多功能于一身的高度自動(dòng)化臨床級(jí)別細(xì)胞制備平臺(tái)，提供一種由多個(gè)功能模塊組成的一體化系統(tǒng)。

但其使用受到一些缺點(diǎn)的限制，例如成本高，長時(shí)間細(xì)胞培養(yǎng)期間其他功能部分不可用，以及需要定制供應(yīng)商設(shè)計(jì)軟件。

 瑞士CDMO巨頭Lonza與Octane Biotech合作開發(fā)自動(dòng)生物反應(yīng)器Co-coon?，這是一個(gè)由多個(gè)一體化單元組成的高通量系統(tǒng)，可以通過可定制規(guī)模的高通量方式并行處理源細(xì)胞，被稱為GMP-in-a-box系統(tǒng)。

QbD

QbD始于所需的產(chǎn)品質(zhì)量屬性的描述，這直接確定了影響產(chǎn)品安全性和有效性的特征和相關(guān)參數(shù)，并為量化參數(shù)變異創(chuàng)造了設(shè)計(jì)空間。通過將科學(xué)知識(shí)和風(fēng)險(xiǎn)分析整合到制造過程的開發(fā)中，QbD可識(shí)別合適的操作信封（envelope），并且可通過知識(shí)的增加進(jìn)行迭代修改，從而生產(chǎn)高質(zhì)量的產(chǎn)品。

鑒于CAR-T產(chǎn)品的異質(zhì)性和產(chǎn)品質(zhì)量的不確定性，如何將細(xì)胞群的可測(cè)量分子和細(xì)胞特征與產(chǎn)品質(zhì)量聯(lián)系起來，將決定CAR-T制造與QbD的成功與否。

原料

CAR-T的原料是高度可變的患者細(xì)胞，通常來自接受放化療的患者，這決定了細(xì)胞中可能包含不同水平的抑制因子或?qū)Υ碳ぞ哂锌剐缘腡細(xì)胞亞群。這些因素對(duì)確定制造過程的可重復(fù)性造成挑戰(zhàn)。

目前，兩種策略可以解決這一挑戰(zhàn)。首先，從T細(xì)胞中除去抑制元件。已經(jīng)報(bào)道了通過幾種方法去除這些抑制元件后T細(xì)胞培養(yǎng)物的改善結(jié)果，例如：（1）通過同時(shí)使用兩種細(xì)胞表面標(biāo)志物CD44和CD137分離抗腫瘤CD4 T細(xì)胞，耗盡抑制性調(diào)節(jié)性T細(xì)胞群（Treg細(xì)胞）；（2）使用涂有抗CD3和抗CD28的大磁珠與適用于袋子的大磁鐵，這代表了一種將隔離和刺激結(jié)合在一起的強(qiáng)大的制造工藝。

其次，起始原料使用定義的T細(xì)胞子集。特定的T細(xì)胞亞群，即記憶干細(xì)胞，被證明可以提供改善的臨床效果并被認(rèn)為是良好的起始原料。例如，針對(duì)巨細(xì)胞病毒或Epstein-Barr病毒的內(nèi)源性抗原反應(yīng)性記憶T細(xì)胞已被用作基因工程的來源T細(xì)胞，因?yàn)榫哂锌乖禺愋缘挠洃汿細(xì)胞有利于預(yù)防病原體，因?yàn)樗鼈冊(cè)诹馨图?xì)胞清除和CAR-T后防止病毒再激活方面具有良好的效果。

病毒載體

病毒載體用于將CAR轉(zhuǎn)導(dǎo)入T細(xì)胞的過程，被認(rèn)為是美國CAR-T細(xì)胞制造過程的關(guān)鍵原料。與高度異質(zhì)和個(gè)性化的血液樣本和CAR-T細(xì)胞終產(chǎn)品不同，病毒載體可以大量生產(chǎn)并在-80°C下穩(wěn)定儲(chǔ)存4至9年。

通常，批量生產(chǎn)用于細(xì)胞療法的病毒載體的時(shí)間超過2周，其中大部分時(shí)間花費(fèi)在產(chǎn)生足夠量的細(xì)胞上。細(xì)胞培養(yǎng)擴(kuò)增數(shù)天至適當(dāng)?shù)臄?shù)量，然后進(jìn)行質(zhì)粒轉(zhuǎn)染，生產(chǎn)病毒載體。病毒載體應(yīng)該具有阻止它們重新獲得復(fù)制能力的特征。密碼子優(yōu)化的Gag/Pol可最大限度地減少載體組分之間的同源性，自我滅活長末端重復(fù)序列，去除所有不必要的序列和輔助基因，這些都是用于預(yù)防這一問題的規(guī)范設(shè)計(jì)。

轉(zhuǎn)染后48小時(shí)內(nèi)，表達(dá)CAR的病毒載體可從培養(yǎng)基中收獲，通過交換培養(yǎng)基可以收獲多批病毒載體。在過濾生產(chǎn)細(xì)胞和碎片后，病毒載體通過一系列下游處理進(jìn)行純化，并使用儲(chǔ)存緩沖液進(jìn)行富集。

載體質(zhì)量包括無菌和純度（即缺乏包裝細(xì)胞）、效力、同一性和滴度，對(duì)于最終CAR-T產(chǎn)物的成功至關(guān)重要，為此，需要在受控條件下、在GMP設(shè)施中以最小的開放處理制造，以及隨后的一系列安全性測(cè)試以確保每批載體產(chǎn)品符合用于T細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)之前的標(biāo)準(zhǔn)。

根據(jù)FDA指南，安全性測(cè)試涉及“細(xì)胞特性測(cè)試”，其通過一系列表型和/或生物化學(xué)檢測(cè)來評(píng)估細(xì)胞特性和異質(zhì)性?！靶軠y(cè)試”評(píng)估CAR-T產(chǎn)品的功能；“活力測(cè)試”定量細(xì)胞活力；“無菌測(cè)試”驗(yàn)證細(xì)胞沒有被外來物質(zhì)污染，如細(xì)菌、真菌、支原體和病毒；“純度測(cè)試”確保產(chǎn)品不含殘留的宿主細(xì)胞和質(zhì)粒DNA，并免除與工藝相關(guān)的雜質(zhì)； “一般安全性測(cè)試”評(píng)估最終產(chǎn)品的臨床應(yīng)用的安全性，以及隨后在給藥前應(yīng)用于解凍冷凍細(xì)胞的“批次釋放測(cè)試”。

當(dāng)細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)中使用整合病毒載體時(shí)，需要進(jìn)行檢查細(xì)胞和培養(yǎng)基中復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒/慢病毒（RCRs/RCLs）是否存在的額外測(cè)試，以幫助確定最終CAR-T產(chǎn)品對(duì)患者輸液的安全性。細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)的載體選擇和優(yōu)化對(duì)于降低大規(guī)模CAR-T制造的最終產(chǎn)品的可變性和最大化效率至關(guān)重要。常用載體是基于γ逆轉(zhuǎn)錄病毒和慢病毒的復(fù)制缺陷型載體系統(tǒng)。慢病毒載體保留了感染非分裂細(xì)胞的能力，因此具有增加的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。第三代微小慢病毒載體由于其體積大大減?。ㄓ梢唤MHIV基因構(gòu)建）和安全性增強(qiáng)（在載體生產(chǎn)細(xì)胞之外無功能）而獲得進(jìn)一步青睞。

當(dāng)使用病毒載體時(shí)，應(yīng)監(jiān)測(cè)生產(chǎn)、收集和純化步驟，并提供有關(guān)提供載體的制造商的詳細(xì)信息。所有整合載體的一個(gè)潛在問題是通過將載體DNA整合到宿主細(xì)胞癌基因附近引起的插入誘變。在這方面，慢病毒載體優(yōu)于γ逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，因?yàn)樗鼈兊恼夏Ｊ接欣谶h(yuǎn)離基因啟動(dòng)子的位點(diǎn)。其他因素如編碼轉(zhuǎn)基因、啟動(dòng)子、細(xì)胞類型和適應(yīng)癥也與插入誘變相關(guān)。

如果載體產(chǎn)物中存在RCR/RCL，則可以增加致癌潛力。因此，在整個(gè)載體制造過程和載體修飾細(xì)胞產(chǎn)物的多個(gè)階段，需要進(jìn)行RCR/RCL的嚴(yán)格測(cè)試。

FDA建議對(duì)使用病毒載體的細(xì)胞和基因治療進(jìn)行長期安全性評(píng)估。例如，一項(xiàng)美國試驗(yàn)已經(jīng)在進(jìn)行，對(duì)接受CTL019治療的患者進(jìn)行15年隨訪（NCT02445222），其主要目標(biāo)是監(jiān)測(cè)與使用病毒載體相關(guān)的延遲不良事件。

非病毒載體

基于mRNA、DNA和轉(zhuǎn)座子/轉(zhuǎn)座酶的電穿孔系統(tǒng)已經(jīng)顯示出能有效轉(zhuǎn)導(dǎo)T細(xì)胞的前景，這解決了有關(guān)病毒載體使用的一些問題，例如安全性問題、大規(guī)模制造和復(fù)雜的操作步驟。

當(dāng)使用非病毒方法進(jìn)行轉(zhuǎn)導(dǎo)時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格控制mRNA或DNA質(zhì)粒的質(zhì)量，試劑應(yīng)為臨床級(jí)，并且電穿孔裝置應(yīng)適用于臨床。

然而，非病毒轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)可能需要長時(shí)間離體擴(kuò)增以使CAR+ T細(xì)胞達(dá)到治療劑量，這在很大程度上限制了它們的臨床應(yīng)用。目前，已經(jīng)提出了幾個(gè)解決這個(gè)問題的方法。例如，非病毒睡美人（SB）轉(zhuǎn)座的CAR基因來自極小化DNA載體（即小環(huán)）而非傳統(tǒng)SB質(zhì)粒可以顯著提高穩(wěn)定的基因轉(zhuǎn)移率和細(xì)胞活力，以滿足臨床CAR+ T細(xì)胞對(duì)產(chǎn)量的要求。

輔助試劑

在離體操作過程中所使用的試劑，例如抗體、細(xì)胞因子、血清或固體支持物如珠子，其質(zhì)量可能顯著影響CAR-T終產(chǎn)品的安全性、純度和效力。

所有試劑必須遵循USP <1043>關(guān)于輔助材料的建議。特別重要的是，鑒于制造過程的高度可變性，應(yīng)限制使用天然來源的物質(zhì)。例如，培養(yǎng)基應(yīng)該是無血清的，以降低被牛海綿狀腦?。˙SE）或病毒污染的風(fēng)險(xiǎn)，如果不可能的話，應(yīng)該提供證實(shí)血清必要性的文件。同樣，推薦使用其他添加劑，如細(xì)胞因子和抗生素，以便去除。如果都不適用，那么它們應(yīng)該被精確地化學(xué)定義，具有臨床等級(jí)，并且沒有內(nèi)毒素和偶然污染。

這些添加的組件需要有效且穩(wěn)定地協(xié)同工作以形成集成的試劑系統(tǒng)，理想的情況下，該制備系統(tǒng)使得制造過程足夠穩(wěn)健，以生產(chǎn)患者來源的合格細(xì)胞產(chǎn)品。

質(zhì)量控制

CAR-T產(chǎn)品的安全性、純度、特性和效力構(gòu)成了其關(guān)鍵質(zhì)量屬性。鑒于其高度異質(zhì)性和復(fù)雜的制造程序，個(gè)體化療法對(duì)這些屬性的要求遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于普通的醫(yī)藥產(chǎn)品。因此，CAR-T產(chǎn)品必須接受許多質(zhì)量控制分析，以滿足所有發(fā)布的標(biāo)準(zhǔn)和良好生產(chǎn)規(guī)范（GMP）指南。

轉(zhuǎn)導(dǎo)效率

轉(zhuǎn)導(dǎo)效率（CAR陽性T細(xì)胞的百分比）是決定CAR-T細(xì)胞體內(nèi)效應(yīng)的重要參數(shù)。目前的指南要求通過流式細(xì)胞儀或等效途徑確定轉(zhuǎn)導(dǎo)效率，但沒有明確規(guī)定該參數(shù)的閾值。

理論上，通過將抗生素抗性基因摻入CAR載體，然后使用相應(yīng)的抗生素選擇陽性細(xì)胞，來生產(chǎn)純CAR陽性T細(xì)胞是可行的。然而，由于其對(duì)CAR-T產(chǎn)品施加的復(fù)雜安全問題，不適用于臨床應(yīng)用。

因此，仍然未確定細(xì)胞產(chǎn)品中是否存在最佳輸注的CAR-T細(xì)胞群，這需要科學(xué)界發(fā)現(xiàn)和制定可行的標(biāo)準(zhǔn)，以及政府當(dāng)局發(fā)布控制轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的相應(yīng)指南。

生物學(xué)效力

CAR-T細(xì)胞的生物學(xué)效力需要在輸注前確定，常用指標(biāo)是CAR-T細(xì)胞的裂解活性。免疫檢查點(diǎn)，如PD-1和CTLA-4，已經(jīng)表明能抑制CAR-T細(xì)胞的效力，但未包含在指南中已確定的效力控制閾值。

由于離體和體內(nèi)CAR-T效力之間存在差異，并且CAR-T細(xì)胞進(jìn)行的修飾增加了釋放測(cè)試的復(fù)雜性，因此有必要制定標(biāo)準(zhǔn)方案來全面評(píng)估CAR-T細(xì)胞的體外生物學(xué)功能：確定改變CAR-T細(xì)胞生物學(xué)效力的分子的表達(dá)水平，并且建立公認(rèn)的通用技術(shù)來控制CAR-T細(xì)胞的生物學(xué)效力。

毒性

毒性是CAR-T產(chǎn)品臨床應(yīng)用的重要考慮因素。研究人員應(yīng)提供全面而詳細(xì)的毒性評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)，包括毒性等級(jí)分類（'on-target'，'on-target, o? tumor'，'o?-target'）和為每個(gè)等級(jí)制定精心設(shè)計(jì)的策略。

除了詳細(xì)說明質(zhì)量控制中的毒性外，在進(jìn)行CAR-T治療時(shí)，還應(yīng)考慮患者護(hù)理，如制備免疫抑制藥物以預(yù)防細(xì)胞因子釋放綜合征的發(fā)生和其他嚴(yán)重的不良反應(yīng)。

與傳統(tǒng)醫(yī)療產(chǎn)品相比，CAR-T細(xì)胞的質(zhì)控過程在可用材料的數(shù)量和測(cè)試的時(shí)間點(diǎn)選擇方面有更多限制。由于這些產(chǎn)品在輸注或冷凍保存之前的保質(zhì)期有限，因此還必須及時(shí)進(jìn)行測(cè)試。

自動(dòng)化

自動(dòng)化有助于標(biāo)準(zhǔn)化質(zhì)量控制方案（protocol）：

    自動(dòng)染色、采集和分析過程將有益于培養(yǎng)細(xì)胞群的流式細(xì)胞儀分析，例如使用MACSQuant分析儀和分析工具；

    自動(dòng)獲取和分析流量數(shù)據(jù)可以幫助快速生成標(biāo)準(zhǔn)化報(bào)告并顯著減少工作量，例如LIMS（實(shí)驗(yàn)室信息和管理系統(tǒng)）；

    實(shí)施自動(dòng)跟蹤和批量記錄，可以促進(jìn)質(zhì)量控制，其中有效的跟蹤需要涵蓋整個(gè)制造過程，即從開始材料采樣到患者輸注。在制程（in-process）和質(zhì)量控制系統(tǒng)的緊密連接中，建立自動(dòng)批量記錄是必要的，這允許在每個(gè)制造過程結(jié)束時(shí)推廣高度標(biāo)準(zhǔn)化的個(gè)性化方案，從而比較不同生產(chǎn)地點(diǎn)和不同流程的質(zhì)量控制數(shù)據(jù)，促進(jìn)我們對(duì)細(xì)胞產(chǎn)品的理解。

然而，盡管目前有許多選擇可以實(shí)現(xiàn)CAR-T（“制造過程”）的某些步驟的自動(dòng)化，但是使整個(gè)過程自動(dòng)化的設(shè)備相對(duì)較少。因此，為了創(chuàng)造最小化人為干預(yù)和易于使用的封閉環(huán)境，開發(fā)覆蓋整個(gè)生產(chǎn)過程的制造系統(tǒng)是必要且具有挑戰(zhàn)性的。此外，關(guān)于細(xì)胞樣品自動(dòng)分析的監(jiān)管協(xié)議能使自動(dòng)化制程中的決策成為可能，從而實(shí)現(xiàn)細(xì)胞治療產(chǎn)品的自動(dòng)化質(zhì)量控制，但目前仍然缺乏。

總之，質(zhì)量控制對(duì)CAR-T療法的成功至關(guān)重要，需要建立一個(gè)由公認(rèn)的指導(dǎo)方針監(jiān)管的標(biāo)準(zhǔn)化質(zhì)量控制框架，并且開發(fā)盡可能少的外部干預(yù)的自動(dòng)化設(shè)備，以幫助實(shí)現(xiàn)這一目標(biāo)。

治療后免疫監(jiān)測(cè)

與傳統(tǒng)的現(xiàn)成藥物不同，穩(wěn)健監(jiān)測(cè)過繼轉(zhuǎn)移后的CAR-T細(xì)胞對(duì)于其生物活性的闡明和改進(jìn)至關(guān)重要。目前的監(jiān)測(cè)重點(diǎn)是評(píng)估CAR-T細(xì)胞頻率和表型，內(nèi)源性免疫反應(yīng)的變化，炎癥細(xì)胞因子水平，腫瘤抗原表達(dá)和微環(huán)境。

CAR-T的大規(guī)模應(yīng)用和患者隨訪涉及高通量和多重分析技術(shù)，包括TCR測(cè)序，基因表達(dá)平臺(tái)，多重質(zhì)譜細(xì)胞計(jì)數(shù)方法和多通道微珠免疫測(cè)定。腫瘤PET成像等新興方法尚未應(yīng)用于CAR-T細(xì)胞反應(yīng)的評(píng)估，但或許能通過追蹤免疫細(xì)胞為CAR-T治療后患者反應(yīng)的理解增添新的內(nèi)容。

在全球范圍內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)化和協(xié)調(diào)監(jiān)測(cè)分析可以使結(jié)果在不同地點(diǎn)的機(jī)構(gòu)、公司和醫(yī)院之間具有可比性，從而產(chǎn)生大量免疫監(jiān)測(cè)信息，有助于推動(dòng)CAR-T領(lǐng)域的進(jìn)一步發(fā)展。

政府監(jiān)管

迄今為止，全球已經(jīng)注冊(cè)了近300項(xiàng)CAR-T臨床試驗(yàn)（不包括試驗(yàn)終止或撤銷），美國有107項(xiàng)試驗(yàn)，中國有130項(xiàng)（根據(jù)www.clinicaltrials.gov）。鑒于獨(dú)特的功能和來源，任何傳統(tǒng)的'off-the-shelf（現(xiàn)成）'藥物都無法代表CAR-T產(chǎn)品。無論是基因還是細(xì)胞療法，都必須遵循它們的任何指導(dǎo)方針和行政管理規(guī)范，特別是發(fā)布的關(guān)于CAR-T細(xì)胞文件。

美國

在美國，FDA將CAR-T細(xì)胞分類為351種生物產(chǎn)品，并通過“Considerations for the design of early-phase clinical trials of cellular and gene therapy products”和“Guidance for industry: preclinical assessment of investigational cellular and gene therapy products”對(duì)其進(jìn)行監(jiān)管。

此外，CAR-T產(chǎn)品應(yīng)遵循指南“Guidance for FDA reviewers and sponsors: content and review of chemistry, manufacturing and control (CMC) information for human somatic cell therapy investigational new drug applications (INDs)”和“Guidance for FDA reviewers and sponsors: content and review of chemistry, manufacturing and control (CMC) information for human gene therapy investigational new drug appli- cations (INDs)”，其中詳細(xì)說明CAR-T細(xì)胞的制造、過程控制、釋放測(cè)試和質(zhì)量控制。

為了加速醫(yī)療產(chǎn)品開發(fā)并向需要它們的患者提供更有效的治療，美國政府于2016年12月發(fā)布了“21世紀(jì)治愈法案（21st Century Cures Act）”，以簡(jiǎn)化藥物和設(shè)備審批流程，并更快地提供臨床治療，美國政府已在9年內(nèi)授權(quán)5億美元用于幫助FDA實(shí)施該法律。在此基礎(chǔ)上，建立了新的加速產(chǎn)品開發(fā)計(jì)劃，包括“再生醫(yī)學(xué)高級(jí)治療（RMAT）”和“突破性醫(yī)療器械項(xiàng)目”，該計(jì)劃為符合涵蓋范圍的生物制品或設(shè)備（包括CAR-T和CAR-T相關(guān)設(shè)備）提供了新的加急選擇。

歐洲

在歐洲，醫(yī)療管理由歐洲藥品管理局（EMA）監(jiān)管，適用于CAR-T產(chǎn)品監(jiān)管的指南是2012年最終確定的“Guideline on quality, non-clinical and clinical aspects of medicinal products containing genetically modi?ed cells”，它定義了科學(xué)原理，為開發(fā)和評(píng)估含有經(jīng)授權(quán)的人類使用的基因修飾細(xì)胞的醫(yī)藥產(chǎn)品提供指導(dǎo)，重點(diǎn)放在細(xì)胞產(chǎn)品的質(zhì)量、安全性和有效性上。此外，CAR-T細(xì)胞的制造應(yīng)遵循先進(jìn)治療藥品（第1394/2007號(hào)）的規(guī)定以及基因轉(zhuǎn)移醫(yī)藥產(chǎn)品的質(zhì)量、臨床前和臨床方面的指導(dǎo)（CPMP/BWP/3088/99）。

與FDA發(fā)布的指導(dǎo)原則不同，EMA有專門的文件來規(guī)范作為醫(yī)療產(chǎn)品的基因修飾細(xì)胞。

中國

標(biāo)準(zhǔn)化和自動(dòng)化制造代表了具有更高安全性、更便宜的產(chǎn)品，因此在發(fā)展中國家實(shí)施CAR-T產(chǎn)品的規(guī)范性規(guī)定尤其有利且具有實(shí)際意義，因?yàn)樗鼈兺ǔ］^少設(shè)有自動(dòng)化的“個(gè)體化車間”。

在我國，有助于規(guī)范CAR-T產(chǎn)品臨床研究的第一個(gè)指南是國家衛(wèi)計(jì)委于1993年發(fā)布的《人的體細(xì)胞治療及基因治療臨床研究質(zhì)控要點(diǎn)》。

后來，國家食品藥品監(jiān)督管理總局（NMPA）發(fā)布了一系列基因和細(xì)胞療法的監(jiān)管準(zhǔn)則。2003年，NMPA發(fā)布了《人基因治療研究和制劑質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則》，其中定義了臨床試驗(yàn)中考慮的醫(yī)療產(chǎn)品的基本要求，并將遺傳修飾的細(xì)胞和攜帶功能基因的載體指定為醫(yī)療產(chǎn)品。NMPA在同一年發(fā)布的另一條適用于CAR-T產(chǎn)品的指南是《人體細(xì)胞治療研究和制劑質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則》。

此外，CAR-T產(chǎn)品還受到應(yīng)用于臨床試驗(yàn)的藥物通用指南的監(jiān)管，即由NMPA于2003年8月發(fā)布的《臨床試驗(yàn)用藥物生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》。監(jiān)管干細(xì)胞臨床試驗(yàn)的指南 ，即“限制臨床應(yīng)用醫(yī)療技術(shù)”，由國家衛(wèi)計(jì)委于2015年發(fā)布。NMPA于2017年12月22日發(fā)布了《細(xì)胞治療產(chǎn)品研究與評(píng)價(jià)指導(dǎo)原則》（試行，第216號(hào)，2017年）。

盡管已經(jīng)發(fā)布不少法規(guī)，但為了安全性的考慮，CAR-T細(xì)胞還有一些獨(dú)特的特征需要受到監(jiān)管，而目前我國的任何監(jiān)管指南都沒有涵蓋這些特征，如轉(zhuǎn)導(dǎo)效率，預(yù)計(jì)CAR-T細(xì)胞的行政文件規(guī)范將在不久的將來發(fā)布。

為整個(gè)CAR-T行業(yè)制定廣為接受的指南具有挑戰(zhàn)性，因?yàn)榫哂胁煌硇突蛏a(chǎn)方法的CAR-T細(xì)胞通常會(huì)產(chǎn)生相同的效果。因此，良好的指導(dǎo)方針應(yīng)保證CAR-T產(chǎn)品的安全性和有效性，使其制造透明化和標(biāo)準(zhǔn)化，并描述生產(chǎn)、制程釋放測(cè)試和認(rèn)證分析的最低和基本標(biāo)準(zhǔn)。

另一方面，一些決定CAR-T產(chǎn)品的效率和安全性的因素，如果沒有作為政府指導(dǎo)原則發(fā)布，則需要作為建議發(fā)布，以幫助保證和改善CAR-T產(chǎn)品的質(zhì)量。例如，預(yù)處理，通常涉及去除抑制抗腫瘤活性的各種抑制因子的非清髓性化學(xué)治療方案，這應(yīng)該需要考慮在未來的指南更新中加入。其他因素，如修飾T細(xì)胞的活力、表型、無菌、同質(zhì)性和遺傳穩(wěn)定性，以及每個(gè)細(xì)胞的基因拷貝數(shù)也可以在指南作出建議。

目前，部分國家已發(fā)布了CAR-T細(xì)胞臨床試驗(yàn)的國內(nèi)指南，并且不同國家的監(jiān)管部門之間進(jìn)行交換是很常見的，例如在FDA和EMA之間以及FDA和CFDA之間的。

為了實(shí)現(xiàn)全球范圍的臨床試驗(yàn)，各國的監(jiān)管指南需要實(shí)現(xiàn)協(xié)調(diào)。全球藥品監(jiān)管機(jī)構(gòu)的九名成員，包括FDA、EMA、加拿大衛(wèi)生部、巴西ANVISA、印度國家生物制品研究所（INB）、日本衛(wèi)生福利和勞工/制藥和醫(yī)療器械局、韓國食品藥品安全部、新加坡衛(wèi)生科學(xué)局（HSA）和Swissmedic已召集組建論壇，討論細(xì)胞或基因治療監(jiān)管的最佳監(jiān)管方案（https://www.i-p-r-f.org/en/working-groups/gene- therapy-workinggroup/）。在制定統(tǒng)一的法規(guī)之前，CAR-T產(chǎn)品開發(fā)中依舊存在很大的不確定性，這在很大程度上取決于監(jiān)管機(jī)構(gòu)的主觀判斷。

（生物谷Bioon.com）

小編推薦會(huì)議 2019（第十屆）細(xì)胞治療國際研討會(huì)

http://meeting.bioon.com/2019cell-therapies？__token=liaodefeng