外泌體直徑在30～120 nm，具有雙層膜結(jié)構(gòu)，以細(xì)胞胞吐方式分泌到細(xì)胞外，是細(xì)胞間傳遞信息的重要載體。肝癌(HCC)源性外泌體中蛋白質(zhì)、RNA等物質(zhì)可被其他細(xì)胞內(nèi)吞，影響腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移，外泌體源性非編碼RNA在HCC復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移中的作用受到重視。環(huán)狀RNA(circRNA)區(qū)別于線性RNA，很多circRNA由編碼蛋白的基因產(chǎn)生，是一類(lèi)新型非編碼RNA，通常不編碼蛋白。研究表明circRNA-100338(hsa_circ_0000130)與HCC肺轉(zhuǎn)移相關(guān)，高轉(zhuǎn)移潛能MHCC97H細(xì)胞來(lái)源的外泌體促進(jìn)低轉(zhuǎn)移潛能Hep3B細(xì)胞的侵襲能力與circRNA-100338高水平相關(guān)，但circRNA-100338過(guò)表達(dá)或表達(dá)抑制后的細(xì)胞外泌體對(duì)HCC的作用效果需要進(jìn)一步研究。

為了觀察人肝癌(HCC)細(xì)胞外泌體環(huán)狀RNA(circRNA)-100338對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)血管形成能力的影響，上海市第六人民醫(yī)院黃修燕等人提取、純化和鑒定上海復(fù)旦大學(xué)肝癌研究所建立MHCC97H細(xì)胞來(lái)源外泌體，并共孵育中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞所HUVEC細(xì)胞(37 ℃、5%CO2)，外泌體示蹤實(shí)驗(yàn)追蹤外泌體能否被HUVEC細(xì)胞內(nèi)化。采用Lipofectamine？ 2000轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染MHCC97H細(xì)胞，提取干擾circRNA-100338后的HCC細(xì)胞上清液外泌體(1 g/L)；增殖實(shí)驗(yàn)用于檢測(cè)HUVEC細(xì)胞增殖能力變化(測(cè)量波長(zhǎng)450 nm)；血管形成能力實(shí)驗(yàn)用于評(píng)估HUVEC細(xì)胞成管(×100)。統(tǒng)計(jì)分析采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。

結(jié)果顯示，透射電子顯微鏡觀察到MHCC97H細(xì)胞來(lái)源的外泌體多數(shù)呈圓形或橢圓形，粒徑分布峰值在120 nm，符合外泌體粒徑特征，蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)檢測(cè)到外泌體標(biāo)志蛋白。MHCC97H細(xì)胞來(lái)源的外泌體被HUVEC細(xì)胞內(nèi)化。肝癌circRNA-100338干擾組和對(duì)照組的外泌體分別共培養(yǎng)HUVEC細(xì)胞48、72、96 h后HUVEC細(xì)胞增殖[吸光度(A)值]分別為0.358±0.005和0.436±0.011，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t＝－16.227， P<0.01)、0.661±0.052和0.888±0.031，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t＝－ 9.146， P<0.01)及1.191±0.084和1.542±0.038，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t＝－9.296， P<0.01)，干擾組血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖能力和對(duì)照組比較顯著下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。干擾組HUVEC成管能力下降，成管結(jié)節(jié)細(xì)小。

本研究發(fā)現(xiàn)肝癌外泌體circRNA-100338增強(qiáng)HUVEC細(xì)胞增殖能力，進(jìn)而促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞血管新生。(生物谷世聯(lián)博研Bioexcellence）

小編推薦會(huì)議  2020（第五屆）外泌體與疾病研討會(huì)

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