為了探討梅毒螺旋體（Tp）體外誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞分泌的外泌體特征及其對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）增殖水平的影響，中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院 許卜方、王千秋等人自雄兔睪丸分離Tp。將人單核巨噬細(xì)胞（THP-1）誘導(dǎo)為巨噬細(xì)胞后，分為實(shí)驗(yàn)組（Tp刺激）和對(duì)照組（不用Tp刺激），12 h后繼續(xù)培養(yǎng)48 h，收集巨噬細(xì)胞外泌體懸液，利用差速離心法和膜親和試劑盒提取外泌體，運(yùn)用透射電鏡、Western印跡鑒定外泌體，Nanoparticle tracking analysis（NTA）粒徑分析儀定量分析外泌體。將HUVEC分為實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組和外泌體洗脫液組，分別用外泌體懸液（4.5 × 108顆粒，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組）、外泌體洗脫液刺激培養(yǎng)一定時(shí)間后，激光共聚焦掃描顯微鏡觀察HUVEC對(duì)外泌體的吞噬，CCK8法檢測(cè)HUVEC增殖活性。

結(jié)果發(fā)現(xiàn)：透射電鏡下的外泌體呈杯托樣，為直徑30 ~ 100 nm的微小囊泡。Western印跡顯示，外泌體豐富表達(dá)膜蛋白CD63、CD9和CD81。相同實(shí)驗(yàn)條件下，NTA測(cè)定顯示，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組外泌體粒徑（u = 1.90，P > 0.05）、濃度（z = -1.604，P = 0.109）差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。兩組外泌體分別與HUVEC共培養(yǎng)5 h后，激光共聚焦顯微鏡下見胞內(nèi)散在分布被吞噬的綠色熒光外泌體。實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組外泌體分別作用于HUVEC 12 h后細(xì)胞增殖水平均高于外泌體洗脫液組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）；在24 h和48 h時(shí)對(duì)照組細(xì)胞增殖水平仍高于外泌體洗脫液組，在48 h達(dá)到峰值（P < 0.05），實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞增殖水平趨于正常；在72 h時(shí)實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組細(xì)胞增殖水平與外泌體洗脫液組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。

THP-1來(lái)源的巨噬細(xì)胞分泌的外泌體在48 h內(nèi)能顯著提高HUVEC細(xì)胞增殖水平，在48 h達(dá)到峰值。在Tp刺激下，THP-1來(lái)源的巨噬細(xì)胞分泌的外泌體在形態(tài)、大小、濃度上與無(wú)Tp刺激巨噬細(xì)胞分泌的外泌體相似，但僅在短時(shí)間（12 h）內(nèi)提高HUVEC增殖水平。(生物谷世聯(lián)博研Bioexcellence）

小編推薦會(huì)議  2020（第五屆）外泌體與疾病研討會(huì)

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