臨床上，各種炎癥、潰瘍、燒傷等造成皮膚的損傷修復(fù)是亟需解決的問題。研究表明，脂肪組織來源的干細胞促進皮膚創(chuàng)傷修復(fù)的一個重要作用途徑是旁分泌，旁分泌的載體外泌體可能是促進創(chuàng)傷愈合的關(guān)鍵因素。與直接使用干細胞相比，富集了來源細胞的蛋白質(zhì)、mRNA和miRNA等信號分子的外泌體具有生物相容性、低毒性、低免疫原性等安全性特性。相對于其他干細胞來源，人脂肪干細胞（human adipose-derived stem cells，hADSC）來源容易且體外擴增速度快，外泌體獲得更為容易，因此hADSC的外泌體更適合運用于皮膚創(chuàng)傷修復(fù)。

為了探究人脂肪干細胞源外泌體對表皮細胞遷移功能的影響，深圳市第二人民醫(yī)院張遠遠， 深圳大學(xué)曾悅， 朱艷霞等從正常人抽脂手術(shù)中獲取的脂肪組織分離培養(yǎng)脂肪干細胞，采用超速離心和超濾結(jié)合的改良法分離收集細胞上清液中的外泌體，采用透射電鏡、動態(tài)光散射法以及Western印跡法鑒定分離出的外泌體。采用0、50、100、200、250、300、400、500、600、800 μmol/L H2O2分別作用HaCaT細胞1 h，CCK8法檢測H2O2對HaCaT細胞存活率的影響。將HaCaT細胞分為正常組（無預(yù)處理）和損傷組（用100 μmol/L H2O2損傷預(yù)處理0.5 h），再將兩組分別分為對照組和治療組，治療組與外泌體共培養(yǎng)，對照組不與外泌體共培養(yǎng)。用共聚焦熒光顯微鏡觀察PKH26熒光標(biāo)記的外泌體是否能被細胞吞噬，用劃痕實驗觀察HaCaT細胞修復(fù)率，用Transwell實驗評估細胞遷移能力。多組間比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用LSD檢驗，相關(guān)性檢驗采用Spearman檢驗。

透射電鏡觀察顯示，分離所得的脂肪干細胞源外泌體是直徑60 ~ 80 nm的茶托樣納米囊泡，而動態(tài)光散射法測量顯示，分離的外泌體純度為65.88%，表達CD63、Alix和TSG101，具有外泌體的基本特征。CCK8法顯示，0 ~ 800 μmol/L H2O2處理HaCaT細胞1 h后細胞存活率呈逐漸降低趨勢，H2O2濃度與HaCaT細胞存活率呈負(fù)相關(guān)（r = -0.91，P < 0.01）。共聚焦熒光顯微鏡觀察，分離的外泌體能被損傷后的HaCaT細胞攝入。劃痕實驗顯示，正常對照組、正常治療組、損傷對照組、損傷治療組HaCaT細胞12 h劃痕面積修復(fù)率分別是40.26% ± 0.64%、69.57% ± 0.69%、32.28% ± 0.31%、69.62% ± 1.68%，損傷治療組顯著高于損傷對照組（t = 37.33，P < 0.01）。Transwell實驗結(jié)果顯示，4組10倍視野下遷移細胞數(shù)分別是20.85 ± 4.84、44.8 ± 5.24、14.95 ± 2.58、40.05 ± 7.66，損傷治療組大于損傷對照組（t = 25.10，P < 0.01）。

人脂肪干細胞源外泌體具有促進氧化應(yīng)激損傷的HaCaT細胞遷移的能力。(生物谷世聯(lián)博研Bioexcellence）

小編推薦會議  2020（第五屆）外泌體與疾病研討會

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