膿毒癥肺損傷在危重癥患者中有著很高的發(fā)病率和病死率，主要特征表現(xiàn)為炎性細胞活化和彌漫性肺泡損傷。革蘭陰性細菌外膜釋放的脂多糖（LPS）被認為是引起膿毒癥肺損傷的重要因素。當機體受到LPS刺激時，可導致肺泡上皮細胞、肺毛細血管內皮細胞和肺間質的急性彌漫性損害，巨噬細胞在肺內聚集、浸潤、活化，釋放大量炎癥介質和細胞因子，引起急性肺損傷甚至急性呼吸窘迫綜合征。
為了探討脂多糖（LPS）刺激肺泡上皮細胞（RLE-6TN）分泌的外泌體對肺泡巨噬細胞（NR8383）的致炎效應，南昌大學第一附屬醫(yī)院丁成志等運用Transwell共培養(yǎng)體系，將經(jīng)過不同處理的RLE-6TN細胞（正常組、LPS刺激組、外泌體抑制劑組、外泌體抑制劑預處理+LPS刺激組）分別與NR8383細胞共培養(yǎng)，NR8383細胞單培養(yǎng)作為空白對照組，共培養(yǎng)12 h后利用熒光定量PCR（qPCR）法檢測各組NR8383細胞中IL-6、TNF-α、IL-1β的mRNA相對表達量。為進一步探討肺泡上皮細胞分泌的外泌體對NR8383炎癥反應的影響，采用差速超速離心法分別提取實驗組外泌體（LPS刺激RLE-6TN細胞分泌的外泌體）和對照組外泌體（正常RLE-6TN細胞分泌的外泌體），運用透射電鏡、蛋白免疫印跡鑒定外泌體，用qNano粒子直徑分析儀檢測外泌體粒子直徑。將NR8383細胞分為實驗組，對照組，PBS組，分別加入外泌體懸液（10 μg/mL，實驗組和對照組）和等體積的PBS,培養(yǎng)12 h后，用激光共聚焦顯微鏡觀察NR8383細胞對外泌體的吞噬，用酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）檢測細胞上清液中炎癥因子的IL-1β、TNF-α、IL-6的表達水平。

結果發(fā)現(xiàn)：Transwell共培養(yǎng)實驗中，與空白對照組相比，LPS組的炎癥因子mRNA相對表達量顯著升高（P<0.01）,而與LPS組相比，外泌體抑制劑預處理+LPS組的炎癥因子mRNA相對表達量卻明顯降低（P<0.01）；提取的外泌體經(jīng)過透射電鏡觀察為圓形或橢圓形囊泡，直徑為40~100 nm，表達外泌體標志物CD63和CD9；兩組外泌體與NR8383細胞共培養(yǎng)5 h后，激光共聚焦顯微鏡下見胞內散在分布被吞噬的紅色熒光外泌體。實驗組、對照組外泌體分別作用于NR8383細胞后，與PBS組相比，實驗組外泌體引起NR8383細胞炎癥因子表達的顯著升高（P<0.01）,對照組外泌體則差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。

LPS刺激肺泡上皮細胞分泌的外泌體能夠激活肺泡巨噬細胞產生致炎作用。(世聯(lián)博研(Bioexcellence)世聯(lián)博研Bioexcellence）

小編推薦會議  2020（第五屆）外泌體與疾病研討會

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