糖尿病腎?。╠iabetic nephropathy，DN）是糖尿病的嚴(yán)重并發(fā)癥之一，也是導(dǎo)致終末期腎病（ESRD）最常見(jiàn)的原因。外泌體（exosomes）是由膜衍生而來(lái)的納米級(jí)囊泡，已被證實(shí)可由多種細(xì)胞分泌，通過(guò)將其攜帶的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、RNA轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞而成為細(xì)胞間的交流信使。多個(gè)研究證明，外泌體在DN的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用。DN患者腎小管功能障礙往往出現(xiàn)較早，其程度與血糖水平直接相關(guān)。

為了探討高糖環(huán)境下腎小管上皮細(xì)胞來(lái)源外泌體誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞激活的作用與機(jī)制，安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院王東等使用下列實(shí)驗(yàn)方法：正常糖（5.5 mmol/L）及高糖（30.0 mmol/L）分別處理人腎小管上皮細(xì)胞（HK2）48 h，收集兩組上清液，使用超速離心法提取外泌體，采用透射電鏡、Western印跡鑒定外泌體。兩組外泌體以PKH67標(biāo)記后分別刺激人急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞株（THP-1）誘導(dǎo)分化的巨噬細(xì)胞，激光共聚焦觀察THP-1巨噬細(xì)胞是否吞噬外泌體；顯微鏡下觀察THP-1巨噬細(xì)胞的形態(tài)；Transwell小室法檢測(cè)THP-1巨噬細(xì)胞的趨化能力；實(shí)時(shí)熒光定量PCR與酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）分別檢測(cè)THP-1巨噬細(xì)胞的誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）、腫瘤壞死因子（TNF-α）、白細(xì)胞介素1β（IL-1β）、單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1/CCL2）水平；Western印跡檢測(cè)各組p-JNK、p-p38MAPK和NF-κB p65蛋白的水平。

結(jié)果發(fā)現(xiàn)，上清液經(jīng)超速離心獲取的囊泡，在電鏡下觀察到外泌體，粒徑30~100 nm。Western印跡檢測(cè)囊泡表達(dá)外泌體的標(biāo)志蛋白CD63和TSG101，不表達(dá)Calnexin蛋白，提示所獲取外泌體的純度較高。（2）激光共聚焦證實(shí)各組外泌體均能被THP-1巨噬細(xì)胞吞噬。與正常糖外泌體刺激組相比，高糖外泌體刺激組的THP-1巨噬細(xì)胞趨化能力增強(qiáng)，iNOS、TNF-α、IL-1β、MCP-1的表達(dá)和分泌水平均上調(diào)（均P<0.01），p-JNK、p-p38 MAPK和NF-κB p65蛋白水平也顯著升高（均P<0.01）。

研究表明，高糖環(huán)境下腎小管上皮細(xì)胞分泌的外泌體可通過(guò)MAPK/NF-κB信號(hào)通路誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞的激活和功能改變。(生物谷Bioon.com）

小編推薦會(huì)議  2020（第五屆）外泌體與疾病研討會(huì)

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