為了探討癌相關(guān)成纖維細胞(CAFs)來源的外泌體對骨肉瘤侵襲及轉(zhuǎn)移的影響，山西醫(yī)科大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院等陳成龍人利用人源骨肉瘤細胞株Saos-2采用差速貼壁法分離、培養(yǎng)CAFs，顯微鏡下觀察CAFs的形態(tài)，免疫組織化學(xué)觀察α-SMA蛋白表達對CAFs進行鑒定。培養(yǎng)CAFs，采用ExoQuick-TC外泌體提取試劑盒分離外泌體。通過透射電鏡觀察外泌體形態(tài)，Western blot檢測外泌體特異性標(biāo)記蛋白β-actin、CD63表達情況對外泌體進行鑒定。培養(yǎng)人源骨肉瘤細胞株Saos-2，分為外泌體組和對照組，采用細胞劃痕及Transwell小室實驗觀察外泌體對Saos-2細胞遷移和侵襲能力的影響。選取一級5周齡BALB/c-nu雌性裸鼠12只，按編號隨機分為外泌體組和對照組，每組6只。兩組均采用皮下移植成瘤法在裸鼠右側(cè)背部皮下接種人骨肉瘤Saos-2細胞與Matrigel基質(zhì)膠混合懸液，建立裸鼠骨肉瘤腫瘤模型。造模結(jié)束后即刻進行尾靜脈注射：外泌體組每只裸鼠通過尾靜脈注射濃度為0.1 μg/μL的外泌體懸液30 μL，對照組裸鼠尾靜脈注射等量生理鹽水，兩組均1次/周，共注射6次。第1次注射后每日觀察裸鼠成瘤情況，從裸鼠右側(cè)背部皮下可觸及腫塊開始，測量兩組裸鼠腫塊的最長徑和最長徑的最大垂直短徑，計算腫瘤體積，此后每周測量1次，共測量6次。完成最后一次測量后腹腔麻醉斷椎法處死裸鼠，完整取出腫塊并稱重。取裸鼠肺組織進行切片HE染色觀察兩組裸鼠肺轉(zhuǎn)移情況。

結(jié)果顯示：顯微鏡下觀察CAFs呈長梭形，排列雜亂，無方向性；細胞免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示：CAFs的α-SMA蛋白表達陽性，提示CAFs提取成功。電鏡觀察外泌體呈70～100 nm圓形或橢圓形膜性囊泡狀結(jié)構(gòu)；Western blot結(jié)果顯示外泌體中CD63蛋白呈高表達，β-actin蛋白表達較弱，提示成功分離CAFs來源外泌體。細胞劃痕實驗、侵襲實驗結(jié)果顯示：外泌體組細胞遷移距離、遷移率、侵襲細胞數(shù)目分別為(0.19±0.02)mm、0.81%±0.11%、(53.67±5.69)個，均高于對照組的(0.81±0.11)mm、0.32%±0.11%、(31.67±8.08)個，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(t＝6.209、6.209、3.856， P值均<0.01)。外泌體組和對照組12只裸鼠采用皮下移植成瘤法接種人骨肉瘤Saos-2細胞與Matrigel基質(zhì)膠混合懸液，均造模成功，實驗過程中無一例動物死亡。兩組裸鼠均于第1次注射腫瘤細胞后1周觸及腫塊，腫瘤體積均隨著時間的延長明顯增大，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(F＝49.428、8.477， P值均<0.05)。兩組間比較，第1、2次測量腫瘤體積，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P值均>0.05)；而第3～6次測量腫瘤體積，外泌體組均大于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(t＝4.697、4.825、3.516、2.706， P值均<0.05)。測量6次后處死裸鼠，剝除腫瘤，外泌體組腫瘤質(zhì)量(1.62±0.29)g大于對照組(1.00±0.43)g，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t＝2.929， P<0.05)。肺組織切片HE染色結(jié)果顯示，兩組裸鼠均發(fā)生肺轉(zhuǎn)移，外泌體組肺組織轉(zhuǎn)移灶數(shù)量為6.63(3，17)個，多于對照組的1.17(0，3)個，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(W＝36.000， P<0.01)。

這個研究表明CAFs來源的外泌體可增加骨肉瘤細胞株Saos-2的遷移及侵襲能力，同時促進骨肉瘤的生長和肺轉(zhuǎn)移的形成。(生物谷Bioon.com）

小編推薦會議  2020（第五屆）外泌體與疾病研討會

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