微生物定植是人體腸道的關(guān)鍵過程，微生物定植的順序和時(shí)間決定了腸道微生物的組成，影響宿主后期的代謝和免疫。在人體中，腸道屏障功能和免疫的成熟都發(fā)生在出生前。與足月嬰兒相比，胎兒腸腸道對(duì)大分子的滲透性較強(qiáng)，對(duì)抗原的耐受性較弱。母體IgG通過胎盤轉(zhuǎn)移和胎兒腸道攝取使胎兒出生后腸道免疫反應(yīng)初步形成。因此，母體宮內(nèi)環(huán)境影響著胎兒長期的生命健康軌跡。從生命早期特定微生物的定植情況可以預(yù)測人體未來的健康結(jié)果，包括哮喘和肥胖等。雖然新生兒胎糞是在出生前形成的，但這并不能解釋胎兒腸道微生物定植情況。因而，該研究論文旨在了解微生物在人體腸道的定植時(shí)間。

為防止陰道分娩對(duì)新生兒胎糞微生物的垂直傳播影響，選取破腹產(chǎn)生產(chǎn)的足月胎兒的胎糞樣本。用直腸拭子法和直腸涂片法收集胎兒糞便。同時(shí)進(jìn)行母體皮膚拭子試驗(yàn)以消除母體皮膚對(duì)胎兒糞便微生物的影響。此外收集了出生48h內(nèi)新生兒糞便樣本和6月大嬰兒的糞便樣本，作為陽性對(duì)照。提取糞便基因組DNA，進(jìn)行16S rRNA V3-V4測序和鑒定，分析腸道微生物多樣性。糞便樣品在無菌條件下轉(zhuǎn)移并進(jìn)行厭氧和需氧培養(yǎng)。培養(yǎng)時(shí)間最長為120小時(shí)，陽性培養(yǎng)物在瓊脂培養(yǎng)基上傳代培養(yǎng)后進(jìn)行菌種鑒定。

圖1 直腸拭子法收集胎兒糞便

研究人員收集了胎兒胎糞（20例），陰性對(duì)照組（5例），新生兒糞便（14例），嬰兒糞便（25例）。經(jīng)ɑ多樣性分析發(fā)現(xiàn)，胎兒糞便多樣性遠(yuǎn)低于嬰兒糞便多樣性(P<0.05)，且新生兒糞便的ɑ多樣性與嬰兒糞便多樣性無顯著性差異（P>0.05）。

圖2 糞便微生物多樣性分析

此外，研究人員建立了系統(tǒng)發(fā)育樹，對(duì)比分析各樣本微生物組成，發(fā)現(xiàn)在胎兒胎糞中檢測到的微生物種類與陰性對(duì)照中檢測到的基本一致，為Halomonas和Rhodanobacter。在胎兒胎糞中檢測到的Bacteroides和Staphylococcus未在陰性對(duì)照組中檢出，而Bacteroides僅在1個(gè)樣本中檢出，Staphylococcus僅在與培養(yǎng)基陽性結(jié)果相同的2個(gè)樣本中檢出，研究人員分析后認(rèn)為，該菌在胎兒胎糞的檢出是由母體皮膚污染引起的。

圖3 樣本微生物系統(tǒng)發(fā)育樹

    總之，胎兒腸道微生物的定植并不是出生之前就開始的，新生兒的腸道微生物是胎兒出生期間和出生后獲得的。

（世聯(lián)博研(Bioexcellence) 世聯(lián)博研Bioexcellence）

小編推薦會(huì)議  2021年(第七屆) 腸道微生態(tài)與健康國際研討會(huì)

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