近日，上海交通大學(xué)丁顯廷教授和謝海洋助理研究員團隊在Advanced Materials雜志上發(fā)表論文，報道了一種基于微芯片免疫印跡方法的單細胞轉(zhuǎn)染效率分析芯片（scTAC），用于快速準(zhǔn)確地分析數(shù)千個宿主細胞個體中外源基因的表達差異。scTAC不僅可以對單個細胞中外源基因表達活性的信息進行靈敏、快速、準(zhǔn)確的分析，還可以用于稀有細胞轉(zhuǎn)染效率的分析和轉(zhuǎn)染方法的評

近日，上海交通大學(xué)丁顯廷教授和謝海洋助理研究員團隊在Advanced Materials雜志上發(fā)表論文，報道了一種基于微芯片免疫印跡方法的單細胞轉(zhuǎn)染效率分析芯片（scTAC），用于快速準(zhǔn)確地分析數(shù)千個宿主細胞個體中外源基因的表達差異。scTAC不僅可以對單個細胞中外源基因表達活性的信息進行靈敏、快速、準(zhǔn)確的分析，還可以用于稀有細胞轉(zhuǎn)染效率的分析和轉(zhuǎn)染方法的評估。

轉(zhuǎn)染是細胞生物學(xué)中研究特定基因功能的基本方法。構(gòu)建具有熒光蛋白標(biāo)簽的融合蛋白，對于評估基因編輯效率，追蹤蛋白信號以及無損研究細胞生物學(xué)功能（例如細胞周期）至關(guān)重要。然而，即使在成功轉(zhuǎn)染的細胞中，由于復(fù)雜的酶環(huán)境和蛋白翻譯修飾機制，融合基因的不完全共表達情況會產(chǎn)生廣泛的假陽性信號。同時，外源基因的表達產(chǎn)物在不同的細胞階段呈現(xiàn)出高度的動態(tài)變化特性，造成轉(zhuǎn)染細胞個體基因表達的異質(zhì)性。此外，對于一些難以轉(zhuǎn)染的細胞，如腫瘤干細胞、基因編輯細胞，由于細胞數(shù)量極為稀少，難以采用傳統(tǒng)的方法如Western Blot、熒光流式分選技術(shù)分析相關(guān)基因表達信息。這些問題對現(xiàn)有的細胞轉(zhuǎn)染技術(shù)中結(jié)果的可靠性，轉(zhuǎn)染方法的有效性和準(zhǔn)確性構(gòu)成嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。

為了解決這些難題，該研究報道了一種單細胞轉(zhuǎn)染效率分析芯片（scTAC），每個芯片有2000個微孔陣列，多個芯片并行可以實現(xiàn)高通量檢測，能夠從成千上萬個細胞中迅速篩選已成功轉(zhuǎn)染的細胞，并可對單細胞中的外源基因的共表達情況進行準(zhǔn)確分析，還可對細胞內(nèi)相關(guān)信號通路中蛋白質(zhì)表達進行分析。

該研究報道了利用scTAC對轉(zhuǎn)染后的細胞進行精確定位，通過分析熒光蛋白和靶蛋白的表達強度，得出靶蛋白的表達與熒光蛋白的表達并非總是具有一致性，從而說明傳統(tǒng)方法中使用熒光蛋白進行靶蛋白表達水平評估結(jié)果的不可靠性。(生物谷世聯(lián)博研Bioexcellence）

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