Western Blot服務(wù)-蛋白質(zhì)免疫印跡技術(shù)服務(wù)

世聯(lián)博研生命科學(xué)服務(wù)中心推出you勢服務(wù)項(xiàng)目－Western Blot服務(wù)，該項(xiàng)服務(wù)可幫助客戶解決自蛋白提�。ū磉_(dá)）至蛋白檢測的各種難題。質(zhì)you價(jià)廉。

收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)

以每張膜8個(gè)樣本收費(fèi)，不足8個(gè)樣本的按8個(gè)樣本收費(fèi)。

注：（6個(gè)樣品+陰性對照+陽性對照+marker+內(nèi)參）/膜

服務(wù)范圍

1.如客戶提供組織或細(xì)胞樣本，我們會根據(jù)樣本的特點(diǎn)，選擇適當(dāng)?shù)牡鞍滋崛》椒ㄌ崛〉鞍�，并檢測好蛋白濃度。

2.如客戶需要重組蛋白，我們會根據(jù)客戶具體的要求構(gòu)建表達(dá)載體，選擇合適的表達(dá)和純化系統(tǒng)為客戶制備重組蛋白（具體參見載體構(gòu)建服務(wù)）。

服務(wù)周期

1. 1~2個(gè)星期，具體視樣品數(shù)量而定。

2.如客戶需表達(dá)重組蛋白，服務(wù)周期根據(jù)其蛋白表達(dá)純化的具體情況而定，請來電咨詢。

客戶須知（對材料的要求、注意事項(xiàng)）

1.客戶須在實(shí)驗(yàn)開始前確保其提供材料的數(shù)量和質(zhì)量，并提供相關(guān)信息
A.客戶需提供盡量多的樣品（組織：250~500mg或細(xì)胞：1×106- 107/樣本）；
B.客戶提供有效的一抗，一抗自備或代購；
C.客戶提供檢測目的蛋白的詳細(xì)資料；
D.客戶要確�？贵w的有效性及模型建造的成功性。

2.本公司在收到客戶提供的研究材料后的弟二個(gè)工作日起開始實(shí)驗(yàn)。

服務(wù)程序

1.可在我公司網(wǎng)站內(nèi)直接填寫《Western Blot服務(wù)訂單》發(fā)至我公司郵箱。

2.可下載訂單，填寫完成后，用傳真的形式發(fā)到我公司。

3.可電話聯(lián)系詳談有關(guān)具體要求和服務(wù)內(nèi)容。

4.簽訂《Western Blot服務(wù)合同》，預(yù)付實(shí)驗(yàn)總費(fèi)用的50%作為實(shí)驗(yàn)預(yù)付款。

5.寄送：委托單位的試驗(yàn)材料和試劑等均須采用te快專遞形式郵寄，有低溫要求的、固定要求的，按低溫保存、固定防碎方法運(yùn)輸

,以確保實(shí)驗(yàn)物品的安可靠。

6.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，本公司將結(jié)果及時(shí)發(fā)給客戶，同時(shí)根據(jù)客戶要求處理相關(guān)材料

A.實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖；

B.詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)步驟和相關(guān)數(shù)據(jù)；

C.完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告。

7.客戶應(yīng)對所提供的材料及信息負(fù)責(zé)，如因客戶提供的材料及信息不準(zhǔn)確而引起的實(shí)驗(yàn)延誤或經(jīng)濟(jì)損失由客戶承擔(dān)。

服務(wù)咨詢及技術(shù)支持

·電話:

·Email:[email protected]

服務(wù)項(xiàng)目簡介

Western blot技術(shù)是通過聚丙烯酰胺凝膠電泳后，經(jīng)PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載

體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對

應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標(biāo)記的弟二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的te異性目的基因表達(dá)

的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測蛋白水平的表達(dá)。

應(yīng)用領(lǐng)域

·可以非常有效的鑒定某一蛋白質(zhì)（或表位）的性質(zhì)；

·結(jié)合免疫沉淀法，可以用來定量分析小分子抗原；

·表位作圖；

·結(jié)構(gòu)域分析；

·斑點(diǎn)印跡，可用層析組分，蔗糖梯度或脈沖追蹤實(shí)驗(yàn)分析；

·功能實(shí)驗(yàn)中蛋白質(zhì)復(fù)性；

·配基結(jié)合，免疫印跡后多種配基可同蛋白質(zhì)進(jìn)行配基結(jié)合試驗(yàn)；

·抗體純化；

·由膜上收獲蛋白質(zhì)條帶制備抗體；

·氨基酸組成分析和序列分析，微量蛋白質(zhì)（10 pmol）轉(zhuǎn)移到PVDF膜上或可進(jìn)行氨基酸組成分析和序列分析。

轉(zhuǎn)移的蛋白質(zhì)或多肽條帶可經(jīng)考馬斯亮藍(lán)染色后切下進(jìn)行氨基酸組成分析或序列分析。

技術(shù)步驟

1.蛋白質(zhì)抽提

2.蛋白質(zhì)定量

3.變性聚丙烯酰胺電泳（SDS-PAGE）

4.蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜或PVDF膜

5.膜的封閉和抗體的孵育

6.結(jié)果檢測

7.數(shù)據(jù)分析

8.提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告

FAQ（Frequently Asked Questions）

1.做組織樣品的western blot的時(shí)候，處理樣品有什么訣竅？

必須進(jìn)行研磨、勻漿、超聲處理，蛋白質(zhì)溶解度會更好，離心要充分，膜蛋白需用更劇烈的方法抽提，低豐度膜蛋白可能還要分步

抽提(超速離心)。還有一點(diǎn)就是組織中的蛋白酶活性更強(qiáng)，需要注意抑制蛋白酶的活性（加入PMSF和蛋白酶抑制劑cocktail），封

閉劑一般5%脫脂奶粉。如果一抗為多克隆抗體，使用BSA也是不錯(cuò)的選擇。

2.免疫組化和Western blot可以用同一種抗體嗎？

免疫組化時(shí)抗體識別的是未經(jīng)變性處理的抗原決定簇（又稱表位），有些表位是線性的，而有的屬于構(gòu)象型；線性表位不受蛋白變

性的影響，天然蛋白和煮后的蛋白都含有；構(gòu)象型表位由于受蛋白空間結(jié)構(gòu)限制，煮后變性會消失。如果你所用的抗體識別的是蛋

白上連續(xù)的幾個(gè)氨基酸，也就是線性表位，那么這種抗體可同時(shí)用于免疫組化和Western blotting，而如果抗體識別構(gòu)象形表位，

則只能用于免疫組化。一般抗體說明書上都有注明此種抗體識別的氨基酸區(qū)間。（限于單抗）

3.提供的蛋白樣品是否需濃縮、純化？如何濃縮、純化上清液中的目的蛋白？

按照提供的濃度，如果做Western blot，是不用濃縮樣品的。

4.對小分子蛋白Western blot時(shí)需te別注意哪些條件？

對于20kd的小分子的蛋白，Western Blot中要注意的是：

1、轉(zhuǎn)移時(shí)的時(shí)間

2、轉(zhuǎn)移時(shí)的電流或電壓

3、transfer buffer 中加20%的甲醇

4、可以用13-15%的分離膠

5.如果我提供組織或細(xì)胞，公司提取蛋白跑膠后，剩下的樣品蛋白裂解液可以給我一份嗎？

可以。

6.顯影結(jié)果是否有原始膠片可以提供？

根據(jù)不同的顯影方式來判斷是否提供。