在此之前，《新英格蘭醫(yī)學雜志》曾報道過一例CAR-T首次在實體瘤治療中獲得重大突破的事件：先前僅能用來治療血液腫瘤的 CAR-T療法在一名膠質(zhì)母細胞瘤合并脊柱轉(zhuǎn)移患者體內(nèi)成功消滅了所有的實體腫瘤。這項臨床試驗(NCT02208362)在City of Hope癌癥中心進行，所使用的IL13Rα2-CAR T細胞產(chǎn)品(MB-101)是和Mustang Bio公司合作開發(fā)的。

近日，這家致力于新型癌癥免疫治療產(chǎn)品(CAR-T)開發(fā)和商業(yè)化的生物制藥公司Mustang Bio表示，計劃通過哈佛大學的授權(quán)，以及與Beth Israel Deaconess醫(yī)學中心(BIDMC)的研究合作協(xié)議，將哈佛大學技術(shù)開發(fā)辦公室的CRISPR/Cas9基因編輯平臺與該公司在研的用于血液腫瘤和實體瘤治療的CAR-T療法相結(jié)合，以開發(fā)更有效的以及off-the-shelf(現(xiàn)成)的CAR-T細胞產(chǎn)品，此次合作也是該公司首次進軍CRISPR領域。

CRISPR/Cas9大咖入主Mustang公司CAR-T研究

基因編輯技術(shù)的應用-細胞療法

值得注意的是，此次哈佛大學授權(quán)的技術(shù)是哈佛干細胞研究所首席研究員，哈佛大學干細胞與再生生物學系副教授Chad Cowan博士的實驗室開發(fā)的。

2013年4月4日期的《Cell StemCell》雜志，Chad Cowan和Kiran Musunuru研究組發(fā)文稱CRISPR比現(xiàn)存的基因編輯工具存在巨大優(yōu)勢，文中比較了CRISPR和TALEN基因編輯技術(shù)的差異，他們發(fā)現(xiàn)CRISPR對于靶向突變非常高效，并將其比喻成“剪刀”。George Church表示，在這之后，該領域吸引了大筆投資，孵化了許多新企業(yè)和新競爭對手。

隨后，Cowan、Musunuru與Church和哈佛大學的Derrick Rossi成立了團隊，探討成立CRISPR公司。他們與行業(yè)內(nèi)所有風投進行了談判，得知Emmanuelle Charpentier團隊和張鋒也在進行風投的宣傳活動，這意味著當時大家已經(jīng)開始了競爭。

2013年底，Charpentier、Novak、Foy和Cowan攜手加入CRISPR Therapeutics公司(首次公布基于CRISPR開發(fā)的同種異體CAR-T臨床前研究結(jié)果)；張鋒、Church和Doudna(現(xiàn)已分道揚鑣)共同建立了Editas Medicine公司(隸屬于Broad研究所)；Sontheimer、Marraffini、Rossi和Barrangou共同成立了Intellia Therapeutics公司。其他藥企和生物技術(shù)公司則快速進入該行業(yè)，向CRISPR創(chuàng)業(yè)公司和Broad研究所支付巨額授權(quán)、合作費用。

2014年，Cowan博士和哈佛大學的同事Derrick Rossi博士在《Cell Stem Cell》雜志上發(fā)表了一項研究(封面文章)：利用CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)，Cowan和Rossi研究小組敲除了造血干細胞的CCR5受體，并證實這樣可導致分化血細胞缺失CCR5。他們表示，可通過骨髓移植將這樣的接受基因編輯的干細胞導入到HIV患者體內(nèi)，來引發(fā)抗HIV免疫系統(tǒng)。

思想領袖的視角：用ips細胞解鎖心血管疾病

根據(jù)簽署的另一份合作協(xié)議，Cowan將領導Mustang Bio公司在BIDM(哈佛大學附屬BIDMC生物醫(yī)學中心)進行的臨床前研究項目。

Mustang Bio總裁兼首席執(zhí)行官Manuel Litchman在一份聲明中表示：“公司致力于推動應用于癌癥治療的創(chuàng)新免疫療法的發(fā)展。CRISPR/Cas9可以使我們能夠為患者提供更加有效和準確的CAR-T細胞產(chǎn)品，并增強CAR-T細胞在患者體內(nèi)的腫瘤殺傷能力和持久性，從而實現(xiàn)更安全有效的治療?！?/span>

而且下一代CAR-T藥物的上市可能會更有效和更便宜，這是off-the-shelf的一個關鍵部分，必將會成為取代昂貴的個性化CAR-T的標志性治療方式。

Litchman作為Novartis的腫瘤學BD前負責人，自2012年8月以來，他領導了諾華與賓夕法尼亞大學合作的CTL019(全球首款獲批上市的CAR-T細胞產(chǎn)品)項目。

現(xiàn)如今，他采用了和CAR-T先驅(qū)者Kite、Juno等一樣的策略，讓科學創(chuàng)始人做早期的研究工作，用來建立快節(jié)奏的關鍵發(fā)展計劃。Mustang公司的合作研發(fā)團隊，包括Stephen Forman在City of Hope國家醫(yī)學中心的實驗室以及Fred Hutchinson癌癥研究中心的頂尖研究人員。2017年9月，由Fred Hutch的Brian Till和Oliver Press博士主導開發(fā)的一款CD20 CAR-T療法授權(quán)給了Mustang Bio公司，以期盡快轉(zhuǎn)化到臨床上去。

極具潛力的CAR-T研發(fā)管線

目前，Mustang公司的CAR-T的研發(fā)管線已增至6個候選產(chǎn)品，與此同時正在推進針對血液腫瘤和實體瘤的CRISPR增強型CAR-T療法。其中MB-101和MB-102兩個明星候選產(chǎn)品正在進行I期臨床試驗。

MB-101(IL13Rα2-specific CAR)：靶向白介素-13受體亞基α2(IL-13Rα2)，IL13Rα2在正常組織表達有限，但在超過50%的GBM(膠質(zhì)母細胞瘤)細胞表面上過表達，因此是一個非常有吸引力的免疫細胞治療靶標。CAR-T細胞表達一個IL-13受體的配體即IL-13，并在其中納入一個單一的點突變，提供針對IL13Rα2的高親和力，并且降低與健康組織細胞表面IL13Rα1的結(jié)合。

CAR-T消滅腫瘤細胞

MB-102(CD123 CAR)：靶向在人血液惡性腫瘤(包括AML)上廣泛表達的異二聚體白介素-3受體(IL-3R)的亞基CD123。Mustang表示，正在研究將CD123作為AML過繼性細胞免疫治療的靶點，因為CD123高表達與增強的AML爆炸性擴散、增加的細胞凋亡抗性以及臨床預后不良有關。

此外，12月11日，City of Hope將在亞特蘭大美國血液學會(ASH)年會口頭會議期間，公開報告Mustang公司的MB-102治療急性髓系白血病(AML)和母細胞性漿細胞樣樹突細胞腫瘤(BPDCN)患者的I期臨床數(shù)據(jù)。

順應發(fā)展大趨勢

現(xiàn)如今，隨著生物醫(yī)學領域各種新興技術(shù)的興起，癌癥的下一代細胞療法與新技術(shù)的結(jié)合無疑會成為一大趨勢。CRISPR基因組編輯技術(shù)助力CAR-T開發(fā)出更安全有效、易獲取的細胞療法，順應了這一發(fā)展的大趨勢。

基于基因編輯技術(shù)CRISPR/Cas9的巨大潛力，研究人員可以對CAR-T細胞進行改進，使其能夠適應多樣化的腫瘤患者。因此，對于CRISPR和CAR-T的結(jié)合，是美國各生物制藥公司躍躍欲試搶先機的項目。CRISPR領域的三大上市公司也早已在CAR-T研究中布局，Intellia Therapeutics牽手CAR-T領導級的諾華，Editas牽手Juno，CRISPR Therapeutics牽手麻省總醫(yī)院癌癥中心(MGHCC)。由此可見，抗癌之戰(zhàn)對諸多公司而言，不僅是場速度之戰(zhàn)，也是團隊合作伙伴之爭。

行業(yè)新洞察

腫瘤免疫療法的發(fā)展趨勢將是聯(lián)合治療。隨著多種新型抗腫瘤療法的發(fā)現(xiàn)，人們已經(jīng)意識到單憑一種療法是無法攻克腫瘤這一頑疾的。只有通過不同機制的抗腫瘤聯(lián)合治療，如抗腫瘤疫苗與PD-L1聯(lián)用、CAR-T療法與PD-L1聯(lián)用，以及腫瘤免疫療法與基因療法聯(lián)用等。靶向藥物和免疫抗腫瘤藥物的聯(lián)合治療必將得以廣泛應用。

艾德摩生物技術(shù)有限公司首席執(zhí)行官彭思穎博士介紹，我們構(gòu)建了一種“腫瘤免疫雙人源化小鼠”，并以該模型為基礎建立腫瘤免疫療法評價平臺——IdealImmune。該模型的構(gòu)建過程有兩個關鍵：人源免疫系統(tǒng)的重建和患者來源腫瘤組織的異種移植。我們以自主構(gòu)建的重度免疫缺陷NPI小鼠為原型，將人的造血干細胞(HSCs)移植到小鼠體內(nèi)，使其重建人免疫系統(tǒng)并在此基礎上移植人源的腫瘤組織，最終獲得腫瘤免疫雙人源化模型。

這幾年的研究表明，包括PD-1/PD-L1抗體和CTLA4抗體等在內(nèi)的檢查點抑制劑具有非常卓越的抗癌能力。然而，作為免疫療法的一種，檢查點抑制劑無法在常規(guī)的腫瘤療法的研發(fā)及評價平臺上進行驗證，這意味著需要構(gòu)建一套針對腫瘤免疫療法特有的臨床前評價方法。

為了驗證艾徳摩IdealImmune平臺是否能夠很好地模擬抗癌藥物在腫瘤微環(huán)境中本應發(fā)揮的作用(例如CD8+T細胞的激活、細胞因子的釋放等)，我們以非小細胞肺癌和胰腺癌為腫瘤模型，使用PD-1抗體對小鼠進行治療。

聯(lián)合治療方案的評價(Collaboration with Crownbio)

結(jié)果顯示，相比于對照組，用藥組小鼠腫瘤組織中浸潤的CD8+T細胞數(shù)量明顯增加，通過流式分析能夠觀察到相應免疫檢查點被抑制，而且能夠檢測到其釋放的細胞因子。這意味著，在腫瘤免疫雙人源化小鼠模型中，免疫檢查點抑制劑能夠有效地激活具有殺傷能力的CD8+T細胞。(生物谷Bioon.com）